[发明专利]一种快速鉴定油葵新葵19号品种纯度的试剂盒

摘要

本发明公开了一种快速鉴定油葵新葵19号品种纯度的试剂盒。通过建立包括油葵SSR技术最佳程序，PCR扩增反应各组分的优化组合和扩增试剂盒，以及扩增条带的显色程序；以商品油葵品种新葵19号及其双亲的DNA为模板，进行大量SSR引物分子标记的筛选和重复，获得了鉴定出能够同时区分父本、母本和杂交种的引物标记399和425，这2个引物标记可有效用于鉴定上述新葵19号杂交种种子的纯度，辨别种子的真伪，利于油葵杂交种种子高效准确的质量控制，加快新葵19号商品种子的质量检测进程。可有效用于鉴定油葵杂交种种子的纯度，辨别种子的真伪，将从DNA提取到分子标记纯度验证时间缩短到一工作日内，具有重要应用价值。

主权项

一种能够同时鉴定区分新葵19号父本、母本和杂交种的试剂盒, 其特征在于，所述试剂盒包括油葵SSR标记， PCR扩增反应各组分的优化组合和扩增试剂盒，以及扩增条带的显色程序；以商品油葵品种新葵19号及其双亲的DNA为模板，进行大量SSR引物分子标记的筛选和重复，获得了鉴定出能够同时区分父本、母本和杂交种的引物标记399和425，具体阐述如下：（1）油葵DNA快速提取试剂盒A配置：50mmol/L Tris‑HCl pH8,0.7 mmol/L NaCl,10 mmol/L EDTA, pH8，1% CTAB，20mmol/L 2‑巯基乙醇；（2）PCR扩增反应试剂盒B配置：5×反应缓冲液4ul，25mmol/L MgCl₂溶液2ul，0.1mmol/L dNTPs溶液3ul,1umol/L Primer溶液3ul，SSR引物标记399和425,5u Taq DNA聚合酶0.2ul；1‑5ng模板DNA；反应总体积为20ul,扩增程序为95℃变性2min，94℃变性45ｓ、57℃退火45ｓ、72℃延伸60ｓ，共30个循环；72℃延伸8min；引物标记399：左序列CGTACGGTGTAGTTCTCATGGT；右序列GGATCACGTGGCGTTCTATT）；引物标记425：左序列CAAAATACCCAGGTCAAAGCA；右序列CCTAGCTTATGGGACGTATGGA；加样缓冲液配试剂盒C配置：0.25%溴酚蓝，0.25%二甲苯青，40克蔗糖定容至100ml。