[发明专利]一种基于“睡美人”转座子系统制作高效转染各类细胞的方法在审
| 申请号： | 201410436949.6 | 申请日： | 2014-09-01 |
| 公开（公告）号： | CN104195112A | 公开（公告）日： | 2014-12-10 |
| 发明（设计）人： | 杨柳;苏晓三;王翼寅;陈睿;张蕾 | 申请（专利权）人： | 昆明市第一人民医院 |
| 主分类号： | C12N5/10 | 分类号： | C12N5/10;C12N15/63 |
| 代理公司： | 无 | 代理人： | 无 |
| 地址： | 650000 云南省昆明市*** | 国省代码： | 云南;53 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开一种基于“睡美人”转座子系统制作高效转染各类细胞的方法，采用BglⅡ和NotⅠ酶切位点以及NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点在pT/HB转座子载体上加入长度为589bp的CMV启动子和长度为720bp的EGFP（增强型绿色荧光蛋白）基因，构建为全长4849bp的pT-CMV-EGFP重组载体；利用脂质体转染pT-CMV-EGFP转座子及辅助转座酶SB11，脂质体的用量为总DNA质量的3-4倍，转座酶SB11与转座子pT-CMV-EGFP质量比1:4体系转染贴壁细胞3T3，悬浮细胞H22和原代培养DC细胞。本发明方法经36-48小时培养后，利用倒置荧光显微镜和流式细胞仪检测，筛选得到一个较通用的转染体系，可高效稳定的转染各种细胞系，并具有较好的适用性和可操作性。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 睡美人 座子 系统 制作 高效 转染 各类 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种基于“睡美人”转座子系统制作高效转染各类细胞的方法，其特征在于：（1）利用 BglⅡ和NotⅠ酶切位点以及NotⅠ和EcoRⅠ酶切位点在pT/HB转座子载体上加入长度为589bp的CMV启动子和长度为720bp的EGFP（增强型绿色荧光蛋白）基因，构建全长为4849bp的pT‑CMV‑EGFP重组载体；（2）利用脂质体转染pT‑CMV‑EGFP转座子及辅助转座酶SB11，脂质体的用量为总DNA质量的3‑4倍，转座酶SB11与转座子pT‑CMV‑EGFP质量比1:4体系转染贴壁细胞3T3，悬浮细胞H22和原代培养细胞DC。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于昆明市第一人民医院;，未经昆明市第一人民医院;许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201410436949.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
