[发明专利]香蕉细菌性枯萎病菌滚环扩增检测方法有效
| 申请号： | 201410450393.6 | 申请日： | 2014-09-05 |
| 公开（公告）号： | CN104232767A | 公开（公告）日： | 2014-12-24 |
| 发明（设计）人： | 王念武;翁瑞泉;陈劲松;吴金枝;于文涛 | 申请（专利权）人： | 中华人民共和国福清出入境检验检疫局 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 卢镇华 |
| 地址： | 350300 福建*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种香蕉细菌性枯萎病菌检测方法，更具体涉及一种运用锁式探针对香蕉细菌性枯萎病菌进行滚环扩增的检测方法，属于农作物防病治病及出入境植物检疫范畴。本发明利用锁式探针能与模板DNA互补结合的特点，在香蕉细菌性枯萎病菌特异性基因片段序列上设计锁式探针，通过引物进行超分支滚环扩增，建立香蕉细菌性枯萎病菌超分支滚环扩增检测方法，可以缩短传统香蕉细菌性枯萎病菌检测时间，确保检测的特异性和灵敏度。而且这种方法可以缩短传统病原菌检测的周期、提高通关速度。这对于提高进境大宗农产品疫情截获检出率，提高防范外来有害生物入侵能力，加快我国口岸进出口货物的通关速度，降低企业成本都具有重大的意义。 | ||
| 搜索关键词： | 香蕉 细菌性 枯萎 病菌 扩增 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种香蕉细菌性枯萎病菌滚环扩增检测方法，其特征在于：步骤如下：首先设计锁式探针和其扩增引物，然后经过环化连接、消化反应，再用滚环扩增引物进行超分支滚环扩增；阳性菌琼脂凝胶电泳后，会出现典型的阶梯状的条带，从而达到检测的目的；所述锁式探针和引物的核苷酸序列如下：锁式探针：Padlock‑Prs2：5'‑AACACACAGTTGCTCGCACTGGCCGAGTGGAACCGAGGAAATAGAGAACCCCATCCAGCACTTCCCTATGTCTCTCCCGTATGGTTTCTTGGCCAGCACCGATGG‑3'；滚环扩增引物如下：PadR：5'‑CCATCCAGCACTTCCCTATGTCT‑ 3'，；PadF：5'‑GGTTCTCTATTTCCTCGGTTCCAC‑ 3'。
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