[发明专利]使用农杆菌注射转化草莓果实的操作方法在审
| 申请号： | 201410473543.5 | 申请日： | 2014-09-16 |
| 公开（公告）号： | CN104212832A | 公开（公告）日： | 2014-12-17 |
| 发明（设计）人： | 王媛花;贾思振;蔡善亚;颜志明;郭正兵;王全智 | 申请（专利权）人： | 江苏农林职业技术学院 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;A01H5/08 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 | 代理人： | 王云 |
| 地址： | 212400 江苏省镇江市*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种使用农杆菌注射转化草莓果实的操作方法，该方法包括农杆菌菌液培养制备，农杆菌注射方法，注射后的GUS组织染色检测。将农杆菌菌液注射的方法进一步细化，注射时期按照草莓发育的不同时期进行细分，优化草莓果实注射过程中的各种因素和参数，找出影响草莓果实注射的原因，从多方面解决草莓果实注射转化法中存在的问题。建立高效、快速、稳定的草莓果实注射方法体系。 | ||
| 搜索关键词： | 使用 杆菌 注射 转化 草莓 果实 操作方法 | ||
【主权项】：
一种使用农杆菌注射转化草莓果实的操作方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：1）将携带包含 GUS 基因的 pCAMBIA2301 质粒的农杆菌菌液在固体培养基上划线后挑取单菌落在液体培养基中于28℃摇菌培养至菌液OD600为0.8～2.4，将菌液离心后倒去上清液，收集菌体沉淀，将收集的沉淀用MS 液体培养基悬浮液重悬，重悬后测定菌液OD600在0.8～2.4，将重悬后的菌液放于冰箱备用；2）用无菌注射器将步骤（1）得到的重悬后的菌液注射至果实中；3）摘取注射后第三天至第七天之间的果实，切成薄片，放入GUS染色液中，进行染色鉴定，染色过夜后用体积浓度70%酒精去除叶绿素后统计转化效率；4）摘取注射后第三天至第七天之间的果实，提取果实RNA，反转录为cDNA后进行荧光定量PCR，检测gus基因表达量。
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