[发明专利]一种腺苷高产微生物菌株的高通量筛选方法

摘要

本发明公开了一种腺苷高产微生物菌株的高通量筛选方法。它是将单菌落接种于装有液体种子培养基的深孔板I中，摇床震荡培养，然后将深孔板I孔中的种子液对应接种到装有发酵培养基的深孔板II中，摇床震荡培养后，将深孔板离心，取上清液测腺苷含量。在酶标板的微孔中加入发酵液上清、缓冲液和适量的腺苷脱氨酶，于30-40℃温浴反应10-40min；反应结束后立即加入反应液A和反应液B，于30-40℃温浴反应20-50min，然后采用酶标仪测定反应液的吸光度值，根据标准曲线和发酵液上清的稀释倍数计算腺苷产量。本发明实现了高通量培养、发酵液的高通量制备及腺苷的高通量测定的目标。

主权项

一种腺苷高产微生物菌株的高通量筛选方法，其特征在于按如下的步骤进行： （1）挑取腺苷生产菌的单菌落，接种于装有液体种子培养基的深孔板I中，盖上深孔板盖子，于30‑40℃、300‑800 rpm摇床培养8‑14 h；（2）将深孔板I孔中的种子液对应接种到装有发酵培养基的深孔板II中，30‑40℃、300‑800 rpm摇床培养8‑48 h；（3）将深孔板II放置于孔板离心机，5000‑10000×g离心5‑30 min，以微量化梯度稀释法将发酵液上清适当稀释；（4）在酶标板的微孔中加入适当稀释的发酵液上清、缓冲液和适量的腺苷脱氨酶，以不加腺苷脱氨酶的实验为空白对照，于30‑40℃温浴反应10‑40 min；（5）反应结束后立即加入反应液A和反应液B，且反应液A和B的加入顺序为反应液A在前，B在后，然后于30‑40℃温浴反应20‑50 min；（6）步骤（5）反应结束后，采用酶标仪测定反应液的吸光度，根据腺苷标准曲线和发酵液上清的稀释倍数计算腺苷产量；（7）根据腺苷检测结果，选择对应的菌株进行摇瓶复筛，获得腺苷高产菌株，其中，所述反应液A包含：氢氧化钠20‑30 g/L、水杨酸45‑75 g/L和亚硝基铁氰化钠1‑3 g/L；反应液B包含：次氯酸钠40‑60 ml/L，步骤（5）反应结束后产生的蓝色物质的检测波长为695‑700 nm，或所述反应液A包含苯酚15‑30 ml/L和亚硝基铁氰化钠0.8‑3 g/L，反应液B为包含氢氧化钠10‑15 g/L和次氯酸钠20‑40 ml/L，步骤（5）反应结束后产生的蓝色物质的检测波长为625‑630 nm。