[发明专利]确定突变核酸碱基的方法及试剂盒

摘要

本发明提供确定突变核酸碱基的方法及试剂盒。本发明涉及核酸扩增技术领域，主要用途为提供一种更准确和灵敏的用于确定样本中靶核酸序列的鉴定区域是否存在突变核苷酸的方法及试剂盒。所述方法包括步骤a：提供第一引物和第二引物，其中第一引物可杂交于含有突变核苷酸的靶核酸序列的鉴定区域；提供包含可检测基团和拥有基于靶核酸序列的扩增区域的序列的标记的寡核苷酸探针；步骤b：通过PCR实施扩增反应；和步骤c：通过扩增曲线确定扩增产物，如果靶核酸序列含有突变核苷酸，第一引物与含有突变核苷酸的靶核酸序列杂交，产生扩增反应；如果靶核酸序列不含有突变核苷酸，第一引物与正常靶核酸序列杂交，不能产生扩增反应。

主权项

一种确定样本中靶核酸序列的鉴定区域是否存在突变核苷酸的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：步骤a：提供能够扩增产物的一对引物：第一引物和第二引物，扩增所述靶核酸序列包括所述鉴定区域的一段核酸序列得到扩增产物，其中所述第一引物可杂交于所述靶核酸序列的所述鉴定区域，所述鉴定区域含有突变核苷酸，所述第一引物序列和相对应的所述靶核酸序列分为至少三个部分：5'端互补部分，不互补部分，3'端互补部分，其中所述3'端互补部分含有至少两个核苷酸，并且与所述包括突变核苷酸的鉴定区域互补；提供标记的寡核苷酸探针，所述标记的寡核苷酸探针包含一个可检测的基团和拥有一段基于所述靶核酸序列的扩增区域的序列；步骤b：利用核酸聚合酶对反应混合液通过PCR实施扩增反应，所述扩增反应的反应混合液包含所述核酸聚合酶、所述标记的寡核苷酸探针和所述一对引物；步骤c：通过扩增曲线确定扩增产物，如果所述靶核酸序列含有突变核苷酸，所述第一引物与所述含有突变核苷酸的靶核酸序列的所述鉴定区域杂交，由于所述3'端互补部分完全互补，使得所述第一引物延伸，产生扩增反应；如果所述靶核酸序列不含有突变核苷酸，所述第一引物与正常靶核酸序列杂交，由于所述3'端互补部分不完全互补，使得所述第一引物不能延伸，不能产生扩增反应。