[发明专利]一种副溶血弧菌外膜蛋白LptD的制备方法及其应用在审
| 申请号： | 201410475962.2 | 申请日： | 2014-09-17 |
| 公开（公告）号： | CN104231061A | 公开（公告）日： | 2014-12-24 |
| 发明（设计）人： | 潘建义;李楚楚;叶智鸧;温良优;陈冉;田丽花 | 申请（专利权）人： | 浙江理工大学 |
| 主分类号： | C07K14/28 | 分类号： | C07K14/28;C12N15/70;A61K39/106;A61P31/04 |
| 代理公司： | 北京科亿知识产权代理事务所(普通合伙) 11350 | 代理人： | 汤东凤 |
| 地址： | 310018 浙江省杭州市杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种副溶血弧菌外膜蛋白LptD的制备方法及其应用，通过培养副溶血弧菌菌种并提取DNA，设计副溶血弧菌外膜蛋白编码序列的引物对，以副溶血弧菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增，PCR产物和载体pET-28a(+)重组转化到E.coli DH5α感受态细胞，将重组载体pET-28a(+)-lptD转化至E.coli BL21感受态细胞中，挑取单克隆摇菌过夜，转接种子液，并在37℃，200r/min下培养至OD600约为0.4后，添加终浓度为1mM的IPTG，继续培养3-4h，以诱导溶血弧菌外膜蛋白LptD蛋白表达，经过纯化最终得到副溶血弧菌外膜蛋白LptD。该副溶血弧菌外膜蛋白具有一定的免疫原性及抗原性，能够有效抵抗副溶血弧菌的感染，以及副溶血弧菌所引起的疾病。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 溶血 弧菌 膜蛋白 lptd 制备 方法 及其 应用 | ||
【主权项】：
一种副溶血弧菌外膜蛋白LptD的制备方法，其特征在于包含以下步骤：1)培养副溶血弧菌菌种并提取DNA；2)设计副溶血弧菌外膜蛋白编码序列的引物对，以副溶血弧菌的基因组DNA为模板进行PCR扩增；3)PCR产物和载体pET‑28a(+)分别进行双酶切、连接后转化到E.coli DH5α感受态细胞，已含卡那霉素平板进行突变筛选阳性克隆，并对筛选得到的阳性克隆进行PCR、双酶切鉴定及测序分析，以验证成功获得溶血弧菌外膜蛋白lptD基因的重组载体；4)将重组载体pET‑28a(+)‑lptD转化至E.coli BL21感受态细胞中，挑取单克隆摇菌过夜；5)转接种子液，并在37℃，200r/min下培养至OD600约为0.4后，添加终浓度为1mmol/L的IPTG，继续培养3～4h，以诱导溶血弧菌外膜蛋白LptD蛋白表达；6)溶血弧菌外膜蛋白LptD蛋白的纯化。
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