[发明专利]一种牡丹花托愈伤组织诱导及分化不定芽方法

摘要

本发明涉及一种牡丹花托愈伤组织诱导及分化不定芽方法。该方法包括如下步骤选取花托外植体并进行预处理及常规消毒；将无菌花托在启动培养基上进行诱导培养，首先暗培养一周，然后转至弱光下培养30～50d，产生初始愈伤组织；将初始愈伤组织，转接到增殖培养基中进行增殖培养；将初始或增殖愈伤组织，转接到不定芽培养基进行不定芽分化培养，首先弱光培养4天，然后转至正常环境中培养，分化出不定芽。采用本发明所述方法，可快速获得大量花托愈伤组织及不定芽，诱导率分别达100％和91％，从而攻克了牡丹愈伤组织诱导率低、诱导质量差、不定芽分化困难这一技术难题，为牡丹品种改良和生物技术育种奠定了良好的基础。

主权项

一种牡丹花托愈伤组织诱导及分化不定芽方法，其特征在于，包括如下步骤：1)花托外植体的选取与消毒：选取直径为0.5～0.6cm的花蕾，4℃冰箱预处理5～6d后，常规消毒，剥取无菌花托，花托直径为0.3～0.5cm；2)初始培养：将直径为0.3～0.5cm的无菌花托在启动培养基上暗培养一周，然后转至弱光下培养30～50d，产生初始愈伤组织；弱光下的培养条件为：培养温度25±1℃，光照14h/d，弱光光照强度800～1000Lx；所述启动培养基为MS+2，4‑D0.5～1.0mg/L+KT2.0～2.5mg/L+谷氨酰胺0.5g/L+丝氨酸0.1g/L；3)增殖培养：将初始培养获得的愈伤组织，转接到增殖培养基中进行增殖培养；培养条件为：培养温度25±1℃，光照14h/d，光照强度1500Lx；所述增殖培养基为MS+2，4‑D0.5～1.0mg/L+KT1.5～2.0mg/L+NAA1.5～2.0mg/L+谷氨酰胺0.5g/L+丝氨酸0.1g/L；4)不定芽分化培养：将初始培养或增殖培养获得的愈伤组织，转接到不定芽分化培养基上弱光环境培养4d，然后置于正常环境下培养；所述不定芽分化培养基为MS+ZT2.0～3.0mg/L+6‑BA10.0～15.0mg/L+水解乳蛋白10.0mg/L；所述弱光环境培养条件为：培养温度15±1℃，光照14h/d，弱光光照强度500～600Lx；所述正常环境培养条件为：培养温度20±1℃，光照14h/d，光照强度2000Lx。