[发明专利]循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方法在审

专利信息
申请号: 201410481668.2 申请日: 2014-09-19
公开(公告)号: CN105483209A 公开(公告)日: 2016-04-13
发明(设计)人: 王照元;黄旼仪;林绣茹;颜里真;张家源 申请(专利权)人: 辅英科技大学附设医院
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68
代理公司: 长沙正奇专利事务所有限责任公司 43113 代理人: 何为;袁颖华
地址: 中国台湾*** 国省代码: 中国台湾;71
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摘要: 一种循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方法,该方法至少包含检体前处理步骤、制备活化型KRAS检测芯片步骤、杂合反应步骤、芯片呈色步骤、以及分析判读步骤,而该活化型KRAS检测芯片包含将22个目标基因(target gene)、一组空白对照组(Blank Control与Negative control)及一组内部对照组(Internal Control)三重复点阵于一基材上,在该基材上形成被覆有标定特定核苷酸探针序列的活化型KRAS检测芯片(Activating KRAS Chip)。藉此,利用加权型酵素芯片操作平台(WEnCA),并合并加权因素的概念算法,可用以评估标靶药物-cetuximab疗效,提供一快速、精确、灵敏、低成本、大量分析且易于自动化的WEnCA操作平台的方法,以进行快速生物检体检测分析,完成传统生医检测上所无法达成的目标。
搜索关键词: 循环 癌细胞 kras 致癌 基因 检测 方法
【主权项】:
一种循环癌细胞的KRAS致癌基因检测方法,其至少包含下列步骤:(A)检体前处理步骤:收集待检测的检体,磁珠纯化萃取得该检体中的讯息核醣核酸,将此讯息核醣核酸经由反转录为互补脱氧核醣核酸后,再以酵素标定成探针;(B)制备活化型KRAS检测芯片步骤:将包含22个目标基因、一组空白对照组及一组内部对照组三重复点阵于一基材上,在该基材上形成被覆有标定特定核苷酸探针序列的活化型KRAS检测芯片,其中该22个目标基因为ATP2A2、ATP6V0B、BCL2、CALM2、CEBPB、CLSTN1、COL4A1、CXCL11、CXCR4、CYR61、DVL3、E2F4、ETS1、H2AFZ、L1CAM、LRP1、RAP1B、RPL30、SLC25A5、SPP1、TAF12及TBX19;(C)杂合反应步骤:将A步骤的探针与该活化型KRAS检测芯片进行杂合反应,使该活化型KRAS检测芯片表面的标定特定核苷酸探针序列与该A步骤的探针上的酵素进行杂合处理,并将未反应的探针由芯片上洗净;(D)芯片呈色步骤:将该活化型KRAS检测芯片上杂合后的探针加上呈色剂二氨基联苯胺进行呈色反应;以及(E)分析判读步骤:撷取该活化型KRAS检测芯片呈色反应后的影像,并对呈色反应后的影像结果进行自动化分析,将分析后所得的侦测值以基因加权计算方式,依据每个基因对于疾病形成或抗药性发生的重要性给予个别加权分数,再经由阳性反应基因点乘上基因点的加权值而得到芯片的总分。
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