[发明专利]一种SYBR Green I荧光定量PCR检测兔须癣毛癣菌的方法

摘要

一种SYBR Green I荧光定量PCR检测兔须癣毛癣菌的方法，包括以下步骤：(1)引物合成，(2)标准阳性样品制备，(3)待测样品制备，(4)SYBR Green I荧光定量PCR，(5)绘制标准曲线和溶解曲线，(6)结果判定。本发明的有益之处在于：采用SYBR Green I荧光定量PCR检测兔须癣毛癣菌的方法整个过程仅需要3小时就能得出准确结果，而且一次可以进行96个样品的检测，较其他方法具有操作简单、检测速度快、灵敏度高、特异性强、通量高等优点，能够为疾病的治疗和疫情的控制提供保障。

主权项

一种SYBR Green I荧光定量PCR检测兔须癣毛癣菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)引物合成：上游引物F：5'‑GCAAAGAAGCCTGGAAGAAG‑3'，下游引物R：5'‑GGAGACCATCTGTGAGAGTTG‑3；(2)标准阳性样品制备：提取标准阳性重组菌的质粒DNA，稀释为不同拷贝数梯度；(3)待测样品制备：按Solarbio试剂盒说明书的步骤提取待测样品DNA；(4)SYBR Green I荧光定量PCR：以标准阳性样品和待测样品分别为模板，F和R为引物进行SYBR Green I荧光定量PCR反应；(5)绘制标准曲线和溶解曲线：根据标准阳性样品进行SYBR Green I荧光定量PCR反应结果，绘制标准曲线和溶解曲线；(6)结果判定：当待测样品SYBR Green I荧光定量PCR反应曲线呈“S”型，且Ct值≤36.5、Tm值介于86.48℃～86.65℃之间，判定待测样品中含有须癣毛癣菌；若反应曲线为一条直线，则判断样品中不含须癣毛癣菌。