[发明专利]一种山蜡梅组织培养与快速繁殖的方法

摘要

本发明公开了一种山蜡梅组织培养与快速繁殖的方法，依次包括以下步骤：无菌苗的获得：取成熟的山蜡梅果实，剥出带完整种皮的种子；愈伤组织的诱导和不定芽的诱导：将子叶切下，用解剖刀分成1cm²的小块，接种于基本培养基中；不定芽的增殖和壮苗：将分化出的芽从愈伤组织上切下,转入增殖培养基进行增殖培养；无根苗的生根：待不定芽生长3-4cm高时，切取健壮的不定芽，接种于生根培养基中；组培再生植株的炼苗和移栽：待生根的组培苗再生植株的苗高5cm、根数超过3根，根长超过5cm时，即可进行炼苗，3d后，捣碎培养基取出植株，将再生植株根部埋入培养土中。该方法培养山蜡梅生根快、玻璃化、褐化率低，成活率高。

主权项

一种山蜡梅组织培养与快速繁殖的方法，其特征在于依次包括以下步骤：（1）无菌苗的获得：取成熟的山蜡梅果实，剥出其长圆形的瘦果，用手术剪将瘦果两端各剪去少许，剥出带完整种皮的种子，在超净工作台中将其浸泡于质量分数0.2% 的HgCl₂溶液内消毒17‑40 min，取出后无菌水浸泡冲洗3次，每次5 min；接种于添加了GA₃ 0.1 mg/L +6‑BA 2.0 mg/L+NAA 0.2mg/L的Nitsch基本培养基中；此培养基中的蔗糖添加量为30 g/L，琼脂添加量为7 g/L， pH为5.8‑6.0，培养基曾于121℃下高温高压灭菌20 min；在黑暗中培养7 d后，转入光照培养，培养温度为25±1℃；每光照培养14 h后转入黑暗中培养10 h，光照强度30‑40 μmol/(m²•s)；种子萌发后，待两片子叶展开并变绿时可取子叶作为外植体，或待芽长出后取无菌苗的茎段作为外植体；（2）愈伤组织的诱导和不定芽的诱导：将子叶切下，用解剖刀分成1 cm²左右大小的小块，接种于添加了TDZ 0.1‑2.0 mg/L+NAA 0‑2.0 mg/L+PVP 0‑5.0 mg/L+LH 0‑1.0 mg/L的Nitsch基本培养基中，培养于光照培养室内，每光照培养14 h后转入黑暗中培养10 h，光照强度30‑40 μmol/(m²•s)； （3）不定芽的增殖和壮苗：将分化出的芽从愈伤组织上切下, 转入增殖培养基Nitsch+TDZ 0‑2.0 mg/L+6‑BA 0‑5.0 mg/L+CH 0‑5.0 mg/L+ PVP 1.0 mg/L进行增殖培养；（4）无根苗的生根：待不定芽生长3‑4 cm高时，切取健壮的不定芽，接种于生根培养基12.5‑100%Nitsch+IAA 0‑1.0 mg/L +NAA0‑0.5 mg/L+AC 0‑2.0 mg/L+ CH 2.0 mg/L中；（5）组培再生植株的炼苗和移栽：待生根的组培苗再生植株的苗高5 cm、根数超过3根，根长超过5 cm时，即可进行炼苗，炼苗在光照培养室内进行；首先将组培瓶的瓶盖旋开，让内外空气交流，往瓶中添加少量清水，12 h后可使瓶盖盖住半个瓶口，一半的空间接受日光灯的照射，再过12 h后，取下组培瓶盖，让日光灯完全照射再生植株，3 d后，用玻璃棒将培养基捣碎，小心将再生植株取出，于清水中仔细漂洗剩余的琼脂，将洗净琼脂的再生植株根部埋入培养土中，于植株上面罩上透明容器，待再生植株定植抽出新的叶片后，即可取下容器。