[发明专利]一种老鸦柿组织培养与快速繁殖的方法有效

专利信息
申请号: 201410510678.4 申请日: 2014-09-29
公开(公告)号: CN104255499A 公开(公告)日: 2015-01-07
发明(设计)人: 孙骏威;朱诚;王飞娟;江琼;丁艳菲;蔡冲 申请(专利权)人: 中国计量学院
主分类号: A01H4/00 分类号: A01H4/00
代理公司: 杭州丰禾专利事务所有限公司 33214 代理人: 王晓峰
地址: 310018 浙江省*** 国省代码: 浙江;33
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摘要: 发明公开了一种老鸦柿组织培养与快速繁殖的方法,依次包括以下步骤:(1)老鸦柿外植体的选择和消毒:(2)丛生芽的诱导:(3)不定芽的增殖:将上一步获得的不定芽丛切成不定芽芽块,接种到添加有6-BA0-3.0mg/L,IBA0-5.0mg/L,叶酸0-2.0mg/L,CH0-0.5mg/L,PVP1.0-2.0g/L的Nitsch培养基中;(4)再生植株的生根培养;(5)再生植株的炼苗和移栽。在上述步骤中采用了不同成分及配比的培养基。采用本发明的方法,能够快速地获得老鸦柿植株,利于产业化生产。采用本发明方法,老鸦柿丛生芽的诱导率高达73.5%,不定芽增殖率可达7.75%,植株移栽成活率可达95%以上。
搜索关键词: 一种 老鸦 组织培养 快速 繁殖 方法
【主权项】:
一种老鸦柿组织培养与快速繁殖的方法,其特征在于依次包括以下步骤:(1)老鸦柿外植体的选择和消毒:取4‑10月的老鸦柿新抽出的枝条,根据各枝条的木质化的程度将它们分为轻度、中度和高度的茎段;将这些枝条切成带腋芽的茎段,先用刷子于自来水下轻柔刷洗,加入适量的洗洁精溶液浸泡2‑4 min,用流水冲洗0.5 h后,在超净台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡2 min,用无菌水冲洗3次后,转入5%的次氯酸钠溶液中浸泡15 min,无菌水冲洗3次,后转入滴加了2滴吐温‑20的0.1% HgCl2溶液内浸泡消毒13‑14 min,用无菌水冲洗3次,以正常的极性方向接种到添加有GA3 0.1 mg/L,TDZ 0.5 mg/L,6‑BA 1.0 mg/L的Nitsch培养基中,此培养基中的蔗糖添加量为30 g/L,琼脂添加量为7 g/L, pH为5.8‑6.0,培养基曾于121℃下高温高压灭菌20 min;培养温度为(25±1)℃,光照时间为14 h光/10 h暗,光照强度30‑40 μmol/(m2·s);(2)丛生芽的诱导取7‑8月中度木质化的新梢茎段,于冰箱内4℃处理2 h,先用牙刷于自来水下轻柔刷洗,加入适量的洗洁精溶液浸泡2‑4 min,用流水冲洗0.5 h后,在超净台里将茎段转入70%的酒精溶液中浸泡2 min,用无菌水冲洗3次后,转入5%的次氯酸钠溶液中浸泡15 min,无菌水冲洗3次,后转入滴加了2滴吐温‑20的0.2% HgCl2溶液内浸泡消毒8‑9 min,用无菌水冲洗3次,以正常的极性方向接种到添加GA0.1‑0.5 mg/L,TDZ 0.1‑2.0 mg/L,6‑BA 0‑3.0 mg/L,叶酸0‑2.0 mg/L,CH 0‑0.5 mg/L,PVP 0‑2.0 g/L 的Nitsch培养基内;培养基中蔗糖浓度为3%,琼脂浓度为0.7%,pH 5.8‑6.0,121℃下高温高压灭菌20 min,培养温度为(25±1)℃,光照时间为14 h光/10 h暗,光照强度30‑40 μmol/(m2·s);(3)不定芽的增殖将上一步诱导获得的不定芽丛切成2‑3株不定芽的芽块,接种到添加有6‑BA 0‑3.0 mg/L,IBA 0‑5.0 mg/L,叶酸0‑2.0 mg/L ,CH 0‑0.5 mg/L,PVP 1.0‑2.0 g/L的Nitsch培养基中;(4)再生植株的生根培养切取叶片嫩绿、生长旺盛且2~3 cm高的不定芽,插入到12.5%‑100% Nitsch,NAA 0‑1.0 mg/L ,IBA 0‑2.0 mg/L,AC 0‑2.0 mg/,椰子汁 0‑300 g/L的生根培养基中;(5)再生植株的炼苗和移栽待生根的组培苗的苗高长至5 cm以上,根长超过5 cm时,松开组培瓶的瓶盖,往瓶中注入少量清水,扣上瓶盖,12 h后挪开一半瓶盖,再过12 h,移走瓶盖,让灯光直照再生植株培养2 d;然后将培养基捣碎,拿出再生植株,用水将残留的琼脂洗净,将植株定植于珍珠岩、泥炭的混合基质中,浇透水并用透明的聚乙烯塑料薄膜覆盖以保温保湿,室内温度控制在24‑28℃之间;待新叶长出,即可揭开薄膜并叶面喷雾保持湿润,适应3‑5 d后即可移栽大田中。
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