[发明专利]一种罗伊乳酸杆菌的电转化方法

摘要

一种罗伊乳酸杆菌电转化的方法，制备出了适合电转化的罗伊乳酸杆菌感受态细胞，在制备的过程中采用先用10mmol/L的MgCl₂水溶液，再用蔗糖甘油混合溶液洗涤，最后用体积浓度为10%的甘油水溶液洗涤的方法进行洗涤罗伊乳酸杆菌菌体细胞；将重组质粒电转化入所制备的罗伊乳酸杆菌感受态细胞，所用参数为电阻200Ω、电容25μF、电压1.5kv/mm，本发明方法具有较高的转化率，转化效率提高了10倍，该方法可提高后期重组质粒的得率以及基因工程操作的成功率，具有较好的应用前景。

主权项

一种罗伊乳酸杆菌的电转化方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、罗伊乳酸杆菌感受态细胞制备（1）、在MRS固体培养基划线复苏罗伊乳酸杆菌，然后挑取罗伊乳酸杆菌单菌落接种至5 mL的 MRS液体培养基中，置于37℃下过夜培养，得到种子液；将种子液接种到50 mL的MRS液体培养基中，接种量为MRS液体培养基体积的10%，然后置于37℃静置培养，当OD值达到1.0时，取出冰浴10 min，然后4℃、6000 r/min离心15 min，弃上清，收集菌体细胞；（2）、洗涤所收集的菌体细胞，洗涤方法为：先用10mmol/L的MgCl₂水溶液洗涤，再用蔗糖甘油混合溶液洗涤，最后用体积浓度为10%的甘油水溶液洗涤；洗涤结束后加入体积浓度为10%的甘油水溶液，吹打使菌体细胞悬浮，即制备出罗伊乳酸杆菌感受态细胞，分装，置于‑80℃保存，备用；所述蔗糖甘油混合溶液为，体积比为1:1的0.5 mol/L蔗糖水溶液和体积浓度为10%的甘油水溶液的混合物；  步骤二、将所制备的罗伊乳酸杆菌感受态细胞从‑80℃取出，置于冰上解冻5 min，加入2μL浓度为0.2μg/μL的质粒载体pLEM415‑cel15，混匀后将所得混合物转移至预冷的电击杯中，冰浴5 min，轻震电击杯使混合物进入电击杯底部；然后在电阻200Ω、电容25μF、电压1.5 kv/mm的条件下，电击转化感受态细胞，之后将混合物转移到1000μL MRS液体培养基中，置于37℃复苏培养2 h后，涂布于含红霉素的MRS固体培养基上培养24‑48 h。