[发明专利]一种乙型肝炎病毒耐药性和基因型的检测试剂盒与检测方法

摘要

本发明公开了一种乙型肝炎病毒耐药性和基因型的检测试剂盒与检测方法。该试剂盒是基于基因芯片使用的，共包含三组引物。检测时使用三组引物分别对待测样品进行多重不对称PCR扩增，将三种PCR扩增产物混合后与杂交缓冲液混合，制成杂交液；再将杂交液与基因芯片上的探针进行杂交；最后通过PCR产物中的荧光信号来判定所述待测样品的突变型和基因型。检测结果表明：该试剂盒特异性强，灵敏度高，可以同时检测出待测样品的7种突变型和3种基因型，7种突变型包括180M型、181T型、181V型、204I型、204V型、236T型、1896A型，3种基因型包括HBV/B型、HBV/C型、HBV/D型。

主权项

1.一种用于检测乙型肝炎病毒的7种突变型和3种基因型的试剂盒，该试剂盒包括如下三组引物：（1）用于检测乙型肝炎病毒6种突变型的第一组引物，包括：所述乙型肝炎病毒6种突变型为180M型、181T型、181V型、204I‑ATC型、204V型和236T型；a、用于检测180M型的引物为：SEQ ID NO.4所示的正向引物和用于与正向引物配对的SEQ ID NO.9所示的引物；b、用于检测181T型的引物为： SEQ ID NO.5所示的和SEQ ID NO.8中第22‑42位核苷酸分子所示的正向引物，与正向引物配对的SEQ ID NO.9所示的引物；c、用于检测181V型的引物为：SEQ ID NO.3所示的正向引物和与正向引物配对的SEQ ID NO.9所示的引物；d、用于检测204I‑ATC型的引物为：SEQ ID NO.1所示的正向引物和SEQ ID NO.6所示的正向引物，与正向引物配对的SEQ ID NO.9所示的引物；e、用于检测204V型的引物为：SEQ ID NO.2所示的正向引物和与正向引物配对的SEQ ID NO.9所示的引物；f、用于检测236T型的引物为：SEQ ID NO.7所示的正向引物和与正向引物配对的SEQ ID NO.9所示的引物；（2）用于检测乙型肝炎病毒的3种基因型的第二组引物，包括：所述乙型肝炎病毒的3种基因型为HBV/B型、HBV/C型和HBV/D型；g、用于检测HBV/B型的引物为：SEQ ID NO.13所示的正向引物，与正向引物配对的SEQ ID NO.17所示的和SEQ ID NO.18所示的引物；h、用于检测HBV/C型的引物为：SEQ ID NO.15所示的正向引物和与正向引物配对的SEQ ID NO.19所示的引物；i、用于检测HBV/D型的引物为：SEQ ID NO.16所示的正向引物和与正向引物配对的SEQ ID NO.20所示的引物；（3）用于检测乙型肝炎病毒的1896A型和204I‑ATT型的第三组引物，包括：j、用于检测1896A型的引物为：SEQ ID NO.22所示的正向引物，与正向引物配对的SEQ ID NO.24所示的、SEQ ID NO.25所示的和SEQ ID NO.26所示的引物；k、用于检测204I‑ATT型的引物为：SEQ ID NO.21所示的正向引物和与正向引物配对的SEQ ID NO.27所示的引物；所述试剂盒还包括连接有探针的基因芯片，所述探针与标签序列一一对应和特异结合；所述探针的序列如下：（1）用于检测1896A型的探针的序列如SEQ ID NO.28所示；（2）用于检测204I型的探针的序列如SEQ ID NO.29所示；（3）用于检测180M型的探针的序列如SEQ ID NO.31所示；（4）用于检测236T型的探针的序列如SEQ ID NO.32所示；（5）用于检测181T型的探针的序列如SEQ ID NO.33所示；（6）用于检测181V型的探针的序列如SEQ ID NO.34所示；（7）用于检测204V型的探针的序列如SEQ ID NO.36所示；（8）用于检测B型的探针的序列如SEQ ID NO.30所示；（9）用于检测C型的探针的序列如SEQ ID NO.37所示；（10）用于检测D型的探针的序列如SEQ ID NO.38所示。