[发明专利]一种灰葡萄孢菌剂的制备方法

摘要

本发明涉及微生物领域，提供一种灰葡萄孢菌剂的制备方法，包括如下步骤1）固态培养基的制备；2）接种灰葡萄孢；3）固态发酵；4）孢子收集。本发明利用葡萄酒泥固态发酵生产灰葡萄孢菌剂，将酒泥变废为宝，极大地降低了灰葡萄孢菌剂的生产成本，同时，制得的灰葡萄孢菌剂生理活性稳定，其孢子含量达到108‑1010CFU/g，适于大规模生产操作。

主权项

一种灰葡萄孢菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）固态培养基的制备将葡萄酒酒泥与麸皮按质量比1:0.75‑1:1.5混合，控制固态培养基基质的含水量为50%‑60%，充分混匀后灭菌； 2）接种灰葡萄孢向固态培养基质中接种液体灰葡萄孢菌种；3）固态发酵将接种后的固态培养基质置于8‑15℃条件下进行固态发酵，保持发酵环境空气循环，培养5‑14d，至基质长满白色绒毛状的灰葡萄孢菌丝后翻料，将发酵温度升高至18‑22℃再培养3‑5d，至基质表面布满绿色或灰黑色孢子囊后终止发酵；4）孢子收集将发酵所得培养物于45℃风干至含水量小于30%，粉碎后过200目筛，收集得到灰葡萄孢菌剂；所述固体培养基的灭菌工艺为：100℃灭菌30min‑60min；所述液体灰葡萄孢菌种的制备方法如下：1）种子培养基制备：取质量比为1:1的马铃薯和大麦芽，并粉碎，马铃薯粉碎至直径不大于1cm小块，大麦芽粉碎至粒径20目，加入马铃薯质量5倍的水，于60℃糖化8h，过40目筛除渣，滤液用水补充至糖化前体积，121℃湿热灭菌20min；2）菌株选取：所述菌株选自中国农业微生物菌种保藏管理中心保藏的灰葡萄孢ACCC36257或ACCC36258；3）液体种子培养：从所选菌株刮取原种，制备生物量为106‑108CFU/mL的原种孢子悬浮液，按体积比4%‑10%的量接种于种子培养基中，10℃‑20℃条件下发酵1‑2d；所述固态培养基还包括胶体壳聚糖，其添加量为所述基质总质量的0.05%‑0.5%；所述胶体壳聚糖由乙酰度达到75%以上的壳聚糖粉与12mol/L浓盐酸或冰乙酸按质量体积比5：1‑5：3混合搅拌酸化后加水稀释获得。