[发明专利]利用白玉米面为原料制备饲用沼泽红假单胞菌的方法

摘要

本发明公开了一种利用白玉米面为原料制备饲用沼泽红假单胞菌的方法，可有效解决饲用沼泽红假单胞菌的制备，以满足饲料养殖业对饲料生产的需要，技术方案是，包括以下步骤制备菌种、种子培殖、制备液体发酵培养基、接种、发酵培养、载体吸附、烘干，本发明具有以下优点1.发酵培养基原料主要为白玉米面等资源丰富，价格低、简单易得；2.发酵培养基配方简单，自动液体发酵罐发酵生产，操作简单，培养方便，生长速度快，发酵周期大大缩短，只有72～96h；3.能制备饲用沼泽红假单胞菌；4.饲用沼泽红假单胞菌，应用效果好，经济社会效益显著；5.采用我国农业部许可微生物菌株沼泽红假单胞菌AS1.2352进行发酵生产，安全性高，是绿色饲用添加剂。

主权项

一种利用白玉米面为原料制备饲用沼泽红假单胞菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：A.制备菌种，方法是：(1)菌种活化，采用沼泽红假单胞菌(Rhodopseudomonas palustris)AS1.2352，将沼泽红假单胞菌AS1.2352菌株接入玻璃培养皿内的ATYP琼脂液体培养基中，培养基液面上滴加液体石蜡封注液面，在28～30℃下，用40W白炽灯距灯最下端距离15‑25cm处照射，厌氧静置培养5d～7d，得活化菌种；(2)种子培殖，方法是：首先配制种子用培养基，将甘油1.0g、酵母膏1.0g、磷酸氢二钾0.3g，微量元素溶液0.05mL，维生素溶液0.15mL，水1000mL混合配制成培养基，将培养基装入培养皿中，每250ml的容积内装入培养基100mL，在0.1Mpa灭菌30min，灭菌后冷却至30℃备用；然后，将步骤(1)得到的活化菌种接种于已灭菌冷却后的培养基中，接种量为每250mL的容积内接入培养基重量的3～5％，在转速80r/min，28～30℃条件下培养60～72h，得到种子，革兰氏染色阴性，镜检无杂菌，种子液OD660值达到0.5以上，沼泽红假单胞菌菌数达到0.5×108个/mL以上；B.制备饲用沼泽红假单胞菌，方法是：(1)制备液体发酵培养基：白玉米面2.0g、酵母膏1.0g和水1000mL，其中，白玉米面过0.42mm孔径筛，用部分水润湿，酵母膏再取部分水溶解成酵母膏溶液，然后润湿的白玉米面及酵母膏溶液混合均匀加入10L发酵罐内，并补加入剩余的水，罐压控制在0.1～0.11Mpa之内，在位灭菌30min得灭菌后的液体发酵培养基；(2)接种，将液体发酵培养基冷却至30℃，罐内压力减至0.01Mpa以下，接入步骤A中得到的种子，接种比例为液体发酵培养基重量的3～5％；(3)发酵培养，将已冷却接种的液体发酵培养基装入10L发酵罐中，液体发酵培养基的装液量为7L，使罐压保持在0.03～0.05Mpa之间，控制调节发酵温度28～30℃，搅拌转速100r/min，通入发酵罐的无菌空气流量为1.5NL/min，发酵时间72～96h，得沼泽红假单胞菌发酵液，镜检无杂菌，发酵液OD660值达到1.5以上，沼泽红假单胞菌菌数达到5×108个/mL以上；(4)载体吸附，用麸皮为载体，吸附沼泽红假单胞菌发酵液，得固体饲用沼泽红假单胞菌；(5)烘干，在温度35‑50℃下将固体饲用沼泽红假单胞菌烘干，粉碎：过0.42mm孔径筛，分装即可。