[发明专利]一种抗非洲猪瘟病毒的特异性IgY抗体及制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种抗非洲猪瘟病毒p54蛋白的特异性IgY抗体及其制备方法，及利用该方法生产的IgY抗体在特异性检测非洲猪瘟病毒抗体中的应用。该特异性IgY抗体可以通过以下方法制备：利用基因重组表达的方法制备p54蛋白抗原，免疫23周龄海兰蛋鸡，共进行4次免疫，收集鸡蛋，利用饱和硫酸铵沉淀法提取和纯化卵黄免疫球蛋白(IgY抗体)。基于该特异性IgY抗体所建立的检测非洲猪瘟血清抗体的竞争ELISA方法，效果良好，只有非洲猪瘟的阳性血清检测结果呈阳性，与商品化ASFV抗体检测ELISA试剂盒的平行检测结果一致。该竞争ELISA方法可用于非洲猪瘟的血清流行病学普查和监测，防控该病经出入境口岸传入国内。

主权项

一种抗非洲猪瘟病毒p54蛋白的特异性IgY抗体的制备方法，包括以下步骤：(1)将非洲猪瘟病毒p54蛋白基因连接在原核表达载体pET‑52b(+)3C/LIC上，将所述表达载体转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，并诱导其表达，获得所述非洲猪瘟病毒重组p54蛋白抗原；(2)应用(1)所述重组p54抗原免疫产蛋鸡；所述免疫产蛋鸡的方法如下：第一次免疫：将免疫抗原与等量弗氏完全佐剂乳化,抗原免疫剂量为200μg/只；第二次免疫：第一次免疫后14d，将免疫抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化，抗原免疫剂量为200μg/只；第三次免疫：第二次免疫后14d，将免疫抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化，抗原免疫剂量为200μg/只；第四次免疫：第三次免疫后30d，直接注射免疫抗原，不使用佐剂，抗原免疫剂量为200μg/只；(3)收集鸡蛋，分离蛋黄，提取卵黄免疫球蛋白，所述卵黄免疫球蛋白中即含有特异性的抗非洲猪瘟病毒p54蛋白的IgY抗体。