[发明专利]一种丹参多酚酸提取物指纹图谱及有关成分的含量测定方法

摘要

本发明涉及一种丹参多酚酸提取物指纹图谱的建立及有关成分的含量测定方法，包括如下步骤：步骤1：采用超高效液相多波长可见紫外检测法，建立丹参多酚酸提取物数字化定量指纹图谱；步骤2：利用质谱对步骤1中指纹图谱中的峰进行指认，确定紫外检测共有的指纹峰；步骤3：采用高效液相色谱可变波长检测法对步骤2中指认出的三个含量较大、活性比较明显且结构明确的指标性成分含量进行测定。

主权项

1.一种丹参多酚酸提取物指纹图谱及含量测定方法，其特征在于，步骤如下：/n步骤1：采用超高效液相多波长可见紫外检测法，建立丹参多酚酸提取物数字化定量指纹图谱；/n步骤2：利用质谱对步骤1中指纹图谱中的峰进行指认，确定紫外检测共有的指纹峰；/n步骤3：采用高效液相色谱可变波长检测法对步骤2中指认出的三个含量较大、活性比较明显且结构明确的指标性成分含量进行测定；/n其中，步骤1的具体步骤如下：/n(1)对照品溶液的制备：精密称定对照品丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸D、丹酚酸A、丹酚酸-LM、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B，加超纯水溶解，定容至丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸D、丹酚酸A、丹酚酸-LM终浓度分别为200-500μg/ml，迷迭香酸、紫草酸终浓度分别为300-600μg/mL，丹酚酸B终浓度为500-1500μg/mL，即得；/n(2)供试品溶液的制备：分别精密称定10-50批丹参多酚酸提取物，样品溶于超纯水，溶解后过滤，稀释成浓度为1mg/mL-5mg/mL的溶液；/n(3)指纹图谱的测定：精密吸取供试品溶液1-5μL，注入超高效液相色谱仪，记录色谱图，即得；/n其中，色谱条件如下：/n色谱柱：UPLC C18柱；/n流动相：溶剂A：水，含0.1％-0.5％甲酸；溶剂B：乙腈，含1％-5％甲醇；/n梯度洗脱：/n0-3min,12-18％B；3-15min,18％B；15-17min,18-20％B；17-25min,20％B；25-28min,20-23％B；28-35min,23％B；35-40min,23-40％B；40-45min,40-95％B；45-50min,95％B；/n温度：30-40℃；/n流速：0.2-0.3ml/min；/n色谱图光谱采集范围：190～400nm；/n其中，步骤3的具体步骤如下：/n(1)供试品溶液制备：取丹参多酚酸提取物，精密称定，加初始流动相溶解并定容至终浓度为0.6-1.2mg/mL，摇匀，即得；/n(2)混合对照品溶液制备：分别精密称取迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B对照品各适量，加初始流动相制成混合对照品溶液，得迷迭香酸质量浓度为100-150μg/mL，紫草酸质量浓度为100-150μg/mL，丹酚酸B质量浓度为1.0-2.5mg/mL的混合对照品溶液；/n(3)精密吸取供试品溶液1-5μL，注入高效液相色谱仪，采用外标峰面积法，同时测定供试品溶液中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量；/n其中，色谱条件如下：/n色谱柱：HPLC C18柱；/n流动相：A相：水，含0.3％～0.6％的甲酸；B相：乙腈，含2％～4％的甲醇和0.3％～0.6％的甲酸；/n梯度洗脱：0～40min，20％B；40～50min，20-70％B；/n流速：0.9-1.1mL/min；/n柱温：30℃-35℃；/n检测波长：288nm；/n其中，步骤(1)、(2)中所述初始流动相，是指80％A流动相和20％B流动相的混合溶液。/n