[发明专利]纳米羟基磷灰石‑基因‑药物复合物及制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种纳米羟基磷灰石‑基因‑药物复合物及制备方法和应用，属于生物医学领域。本发明复合物由纳米羟基磷灰石、抗肿瘤基因、抗肿瘤药物组成，纳米羟基磷灰石尺寸为20‑300nm，基因为抗肿瘤基因，药物为抗肿瘤药物。制备方法为以钙盐和磷酸盐溶液混合制备纳米羟基磷灰石，吸附抗肿瘤基因形成纳米羟基磷灰石‑基因前体复合物，该前体复合物进一步吸附抗肿瘤药物形成复合物；该复合物可高效穿过癌细胞膜，促进癌细胞凋亡。使用生物相容性良好的羟基磷灰石作为共传递载体，安全性高，对基因和药物的负载率高，转染效率高，对癌细胞的杀伤作用大。以纳米羟基磷灰石作为基因和药物的共传递载体在癌症治疗领域具有重大应用前景。

主权项

纳米羟基磷灰石‑基因‑药物复合物，其特征在于所述复合物由纳米羟基磷灰石、抗肿瘤基因、抗肿瘤药物组成，所述纳米羟基磷灰石尺寸为20‑300nm，纳米羟基磷灰石表层由聚乙烯亚胺覆盖，所述纳米羟基磷灰石表层的聚乙烯亚胺为分枝状，其分子量为8900‑120000Da，所述基因为抗肿瘤基因，所述药物为抗肿瘤药物；该纳米羟基磷灰石‑基因‑药物复合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1）将钙盐溶液于0‑4℃冷却，逐滴加入等体积磷酸盐溶液，并维持100‑300rpm/min搅拌，待滴加完成后，持续搅拌0.5‑5h；钙盐溶液终浓度为1‑10mmol/L，磷酸盐溶液终浓度为0.5‑7mmol/L；2）在步骤1）反应体系中缓慢滴加碳酸氢钠溶液，持续搅拌0.5‑5h，其中，碳酸氢钠溶液的滴加量为步骤1）中钙盐溶液体积的0.004‑0.01倍；碳酸氢钠溶液终浓度为0.2‑1.2mmol/L；3）用氨水缓慢调节反应体系的pH值至10‑13，调节完成后持续搅拌0.5‑5h；4）缓慢滴加与步骤2）中碳酸氢钠溶液等体积的聚乙二醇‑400溶液，持续搅拌0.5‑5h；5）将步骤4）反应体系升温至90℃，持续搅拌0.5‑5h；6）停止加热，待反应体系降温至室温后，分别用去离子水和无水乙醇以离心方式各洗涤沉淀2‑3次；7）用去离子水重悬步骤6）得到的沉淀，加入聚乙烯亚胺溶液涡旋震荡混匀，得到HAp‑PEI混合液，室温静置0.5‑5h，其中，聚乙烯亚胺溶液的加入量为步骤1）中钙盐溶液体积的0.1‑0.5倍；加入的聚乙烯亚胺溶液浓度为0.1‑5mg/ml；8）以离心方式离心步骤7）得到的混合液，再以去离子水重悬，得到被PEI包被的纳米羟基磷灰石悬液；9）将步骤8）得到的纳米羟基磷灰石悬液与抗肿瘤基因按质量分数比20:1‑16的比例混合形成纳米羟基磷灰石‑基因前体复合物，然后将该前体复合物于室温静置3‑30min；10）将步骤9）得到的纳米羟基磷灰石‑基因前体复合物与抗肿瘤药物按质量分数比26:1‑10进行混合，并轻轻混合均匀，室温静置3‑30min；11）将步骤10）得到的混合物以离心方式除去游离的抗肿瘤基因和药物，再以去离子水重悬，即得到纳米羟基磷灰石‑基因‑药物复合物；所述抗肿瘤基因为野生型p53基因、Rb基因、p16基因、APC基因、MCC基因、DCC基因、MTS基因、PTEN基因中的任一种或几种；所述抗肿瘤药物为阿霉素、紫杉醇、顺铂、吉西他滨、氟尿嘧啶、盖诺、表阿霉素、环磷酰胺、长春新碱、博莱霉素、多帕菲或它们的衍生物中的任何一种或几种。