[发明专利]一种抗牛病毒性腹泻病毒蛋白E2特异性IgY的制备方法在审
| 申请号： | 201410603881.6 | 申请日： | 2014-10-27 |
| 公开（公告）号： | CN104356232A | 公开（公告）日： | 2015-02-18 |
| 发明（设计）人： | 张小莺;王媛;任昊;江雪梅 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | C07K16/10 | 分类号： | C07K16/10;C07K16/02 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 712100 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种牛病毒性腹泻病毒E2蛋白特异性IgY的制备方法，包括以下步骤：(1)根据BVDV-E2基因序列，设计一对引物，PCR扩增BVDV-E2基因，连接至pMD18T，转化DH5α感受态细胞，经蓝白斑筛选后，提取质粒，酶切分析，阳性质粒测序，对测序结果分析；(2)E2蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化；(3)抗E2-IgY抗体的制备：纯化的E2蛋白免疫产蛋鸡，使用PEG6000沉淀法提取特异性IgY抗体，并进行SDS-PAGE分析，ELISA效价监测，Western blotting特异性分析。本发明提取的抗E2-IgY抗体可较好地结合E2蛋白，而与降解片段无交叉反应。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 病毒性 腹泻 病毒 蛋白 e2 特异性 igy 制备 方法 | ||
【主权项】：
一种抗牛病毒性腹泻病毒E2蛋白特异性IgY的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)牛病毒性腹泻病毒E2基因的克隆与序列分析：根据BVDV‑E2基因序列，利用软件设计一对引物，PCR扩增BVDV‑E2基因，连接至pMD18T载体，转化DH5α感受态细胞，经蓝白斑筛选后，提取质粒，酶切分析，阳性质粒测序，对测序结果进行比较分析；(2)E2蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化：pMD18T和pET‑32a载体使用BamH I和Xho I双酶切，目的片段连接，构建pET‑32a‑E2表达载体，转化Bal21(DE3)pLysS感受态细菌，酶切和PCR鉴定后，优化IPTG诱导浓度和时间，进行大量诱导表达，使用Ni+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化；(3)抗E2‑IgY抗体的制备：纯化的E2蛋白免疫白色来杭产蛋鸡，使用PEG6000提取特异性IgY抗体，并进行SDS‑PAGE分析。
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