[发明专利]一种多效唑单克隆抗体的制备方法

摘要

本发明公开了一种多效唑单克隆抗体的制备方法，包括以下几个主要步骤：（1）采用微波无溶剂法合成人工半抗原多效唑半琥珀酸酯；（2）以多效唑半琥珀酸酯为原料偶联得到多效唑人工抗原；（3）用合成的人工抗原对Balb/c小鼠进行免疫；（5）选择血清效价和特异性最优的小鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合；（5）选择性培养基培养筛选融合细胞，进一步克隆扩培与冻存；（7）将扩大培养后的细胞株注射入小鼠腹腔以生产大量腹水；（8）用辛酸-饱和硫酸铵法纯化腹水中的抗多效唑单克隆抗体。制备得到的抗多效唑单克隆抗体灵敏度高、特异性强，可望进一步运用到免疫传感器、胶体金免疫层析法等技术的构建。

主权项

一种多效唑单克隆抗体的制备方法，其特征在于：是通过以下技术实现的：（1）半抗原的合成：在4‑二甲氨基吡啶的催化作用下，多效唑和琥珀酸酐发生酰化反应，引入活性基团羧基和连接臂，得到半抗原多效唑半琥珀酸酯；（2）全抗原的合成：采用碳二亚酰法将多效唑半琥珀酸酯与牛血清蛋白（BSA）进行偶联，得到免疫全抗原；（3）免疫：用上述全抗原免疫小鼠，第一次免疫采用弗氏完全试剂与免疫抗原充分乳化，腹部皮下多点注射，之后每隔3周加强免疫一次，加强免疫采用弗氏不完全试剂佐剂与抗原充分乳化，最后一次加强免疫通过尾静脉注射50 μg不加佐剂的抗原；（4）筛选：测定小鼠血清效价和其特异性；（5）细胞融合：选择血清效价和特异性最优的小鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合；（6）选择性培养基筛选融合细胞，检测筛选阳性细胞，克隆化培养，进一步克隆筛选阳性细胞，阳性克隆扩培与冻存；（7）腹水制备：将扩大培养后的细胞株注射入小鼠腹腔以制备大量腹水；（8）腹水纯化：采用辛酸‑饱和硫酸铵法纯化抗体。