[发明专利]一种人骨髓间充质干细胞诱导分化内耳毛细胞的方法有效
| 申请号： | 201410607064.8 | 申请日： | 2014-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN104388381B | 公开（公告）日： | 2017-08-22 |
| 发明（设计）人： | 邵建忠;潘若浪;项黎新;刘小园;王萍 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司33201 | 代理人： | 黄美娟,李世玉 |
| 地址： | 310058 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种诱导骨髓MSCs分化内耳毛细胞的方法，以人骨髓为来源，分离骨髓MSCs，利用因子组合与饲养层细胞相结合的方法诱导骨髓MSCs分化内耳毛细胞；本发明所述方法能够有效诱导人骨髓间充质干细胞分化为内耳毛细胞，分化所得细胞表达毛细胞特异蛋白，并且具备一定毛细胞电生理功能。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 骨髓 间充质 干细胞 诱导 分化 内耳 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种人骨髓间充质干细胞诱导分化内耳毛细胞的方法，其特征在于所述方法为：取人骨髓间充质干细胞，接种至诱导液Ⅰ，在37℃，5％CO2培养箱中诱导培养7天，然后换诱导液Ⅱ，在37℃，5％CO2培养箱继续培养7‑10天，0.25％胰酶EDTA消化后，接种至预处理后的鸡胚椭圆囊间质细胞上，加入诱导液Ⅲ，在37℃，5％CO2培养箱继续诱导14‑21天，获得成熟的内耳毛细胞；诱导液Ⅰ终浓度组成：体积浓度5％FBS、45‑55ng/ml IGF‑1、20‑30ng/ml EGF、10μM RA和20‑30ng/ml FGF2，溶剂为DMEM/F12基础培养液；诱导液Ⅱ终浓度组成：体积浓度5％FBS、5‑15ng/ml BMP4和20‑30ng/ml FGF2，溶剂为DMEM/F12基础培养液；诱导液Ⅲ终浓度组成：体积浓度5％FBS和20‑30ng/ml FGF2，溶剂为DMEM/F12基础培养液；所述鸡胚椭圆囊间质细胞预处理方法为：将鸡胚椭圆囊间质细胞用含终浓度2μg/ml丝裂霉素C的DMEM培养液浸泡，在37℃，5％CO2培养箱培养3小时，弃去悬浮液，获得预处理后的鸡胚椭圆囊间质细胞。
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