[发明专利]一种LC-MS/MS检测新鲜烟叶中IPP、GPP、FPP和GGPP的方法

摘要

本发明提供一种LC-MS/MS检测新鲜烟叶中IPP、GPP、FPP和GGPP的方法，包括以下步骤：1）配制提取溶剂；2）新鲜烟叶液氮速冻，冷冻干燥并打碎；3）粉碎好的样品加入提取溶剂，低温超声提取；4）冷冻离心，取上清液并过滤；5）LC-MS/MS对待测样品中IPP、GPP、FPP和GGPP进行检测。其优点在于：样品前处理方法简单，只需超声并过滤，与现有的方法相比，该方法灵敏度高，精密度好，加标回收率高，样品经过滤可直接进样分析，而现有文献中所述方法前处理繁琐费时，需要焦磷酸酶和碱性磷酸酶对样品进行生化反应处理。因此，本发明能有效地提高分析效率，适合复杂基质中超低含量目标物的分析。

主权项

一种LC‑MS/MS检测新鲜烟叶中IPP、GPP、FPP和GGPP的方法，其特征在于：采用提取溶剂低温超声萃取，通过液相色谱‑串联质谱联用仪LC‑MS/MS实现新鲜烟叶中异戊烯基焦磷酸IPP、牻牛儿基焦磷酸GPP、法呢基焦磷酸FPP和牻牛儿基牻牛儿基焦磷酸GGPP的检测，具体步骤如下：1）配制提取溶剂：甲醇/氨水=70/30，v/v；2）新鲜烟叶液氮速冻，冷冻干燥，粉碎机打碎；3）粉碎好的样品加入提取溶剂和氘代内标，0‑10℃低温超声提取；4）提取完的样品冷冻离心，取上清液过0.22 μm微孔滤膜；5）LC‑MS/MS对待测样品中IPP、GPP、FPP和GGPP进行检测，液相色谱、质谱条件如下：Agilent公司Poroshell 120 EC‑C18色谱柱，规格2.1 mm×100 mm i.d.，2.7 μm；柱温20 ℃；流动相为：A：5 mM NH₄HCO₃的水，B：含0. 005%甲酸的乙腈；流速：0.4 mL min^‑1；梯度洗脱：0 min：99%A+1% B，2 min：98%A+2%B，2.1 min：90%A+10%B，8 min：20%A+80%B，8.1 min‑10 min：0%A+100%B，10.1 min‑12 min：99%A+1% B；进样量：5 μL；离子源：电喷雾离子源；负离子扫描；多反应监测；干燥气温度：180℃，干燥气流量：11 L min^‑1，雾化器压力：20 psi；鞘气温度：400 ℃，鞘气流量：12 L min^‑1，毛细管电压：2500 V，喷嘴电压：2000 V；驻留时间：50 ms。