[发明专利]一种快速检测单头蓟马携带番茄斑萎病毒的血清学方法及其应用

摘要

本发明公开了一种快速检测单头蓟马携带番茄斑萎病毒的血清学方法及应用。利用能分泌抗番茄斑萎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株1A5，保藏号为CGMCC No.9343，建立检测单头蓟马携带番茄斑萎病毒的dot-ELISA方法，研发快速检测试剂盒，快速检测田间蓟马携带番茄斑萎病毒的带毒率。利用该发明可对田间蓟马的带毒率进行大规模快速调查，早期预测番茄斑萎病毒病的发生流行爆发趋势。该检测方法快速高效、灵敏特异、高通量又操作简便，为番茄斑萎病毒病的快速诊断、预测预报及科学防控提供技术支撑。

主权项

一种快速检测单头蓟马携带番茄斑萎病毒的血清学方法，其特征在于包括如下步骤：1）田间蓟马的采集、研磨；2）吸取蓟马匀浆液2 µL，点样于硝酸纤维素膜，静置晾干10分钟；3）5%脱脂奶粉的PBST中37℃封闭30‑60分钟；4）上述硝酸纤维素膜放入用5%的脱脂奶粉1:3000倍稀释的保藏号为CGMCC No.9343杂交瘤细胞分泌的抗番茄斑萎病毒的单克隆抗体中，37℃孵育1‑2小时；5）硝酸纤维素膜用PBST缓冲液摇动洗脱3次，每次3分钟，弃洗脱液；6）硝酸纤维素膜放入用5%的脱脂奶粉1:2000倍稀释的Sigma公司货号为A4416的辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG二抗中，37℃孵育1‑2小时；7）硝酸纤维素膜用PBST缓冲液摇动洗脱5次，每次3‑5分钟，弃洗脱液；8）硝酸纤维素膜晾干后，放入Promega公司货号为W4121的TMB显色液中，避光显色5‑15分钟；9）待阳性样品呈现蓝色而阴性对照未显色时，记录结果。