[发明专利]一种利用叶绿素荧光参数Fv/Fm确定产油微藻收获时间的方法

摘要

本发明公开了一种利用叶绿素荧光参数Fv/Fm确定产油微藻收获时间的方法，其步骤1)产油微藻常规培养及胁迫诱导进行产油微藻的常规自养培养；将微藻培养至对数生长中期，进行胁迫条件诱导中性脂积累；2)叶绿素荧光参数Fv/Fm检测诱导产油过程中取样，测定Fv/Fm；3)中性脂含量检测氯仿/甲醇萃取提取藻油，薄层层析色谱法结合图像分析软件测定中性脂含量；4)采收时间的确定细胞内中性脂开始显著积累1‑2天后，进行微藻的采收，如测定的Fv/Fm和中性脂含量显著性相关，中性脂开始显著积累后1‑2天的Fv/Fm范围为Fv/Fm采收范围，相同胁迫条件诱导中性脂生产时藻液Fv/Fm达到采收范围时即为采收时间。叶绿素荧光参数Fv/Fm检测操作简单、快速，干扰因素少，准确稳定。

主权项

一种利用叶绿素荧光参数Fv/Fm确定产油微藻收获时间的方法，其步骤是：1)产油微藻常规培养及胁迫诱导：进行产油微藻的常规自养培养；将微藻培养至对数生长中期或后期时，进行胁迫条件处理诱导中性脂积累；所述的常规自养培养条件为根据使用产油微藻种类选择自养液体培养基，在温度20‑25℃，光强40‑100μmol m‑2s‑1，连续光照条件下通气培养；所述的自养液体培养基为BG11培养基、TAP培养基、Dunaliella培养基、F/2培养基或Chu10培养基；2)叶绿素荧光参数Fv/Fm检测：胁迫条件诱导产油过程中每22‑26小时取样两份，其中一份调节OD700为1.5‑2.0，体积为2‑4mL，测定叶绿素荧光参数Fv/Fm；3)中性脂含量检测：另一份藻样体积为1‑2mL，12000g离心收集沉淀，氯仿/甲醇萃取的方法提取藻油，薄层层析色谱法结合图像分析软件ImageJ测定中性脂含量；4)产油微藻采收时间的确定：细胞内中性脂开始显著积累1‑2天后，进行微藻的采收，根据测定的Fv/Fm和中性脂含量使用数据统计分析软件SPSS 13进行相关性分析，二者存在显著性相关，中性脂开始积累后1‑2天的Fv/Fm范围为Fv/Fm采收范围，此后进行相同胁迫条件诱导中性脂生产时，藻液Fv/Fm达到Fv/Fm采收范围时为微藻的采收时间。