[发明专利]一种磷酸钙转染HEK293T细胞的方法在审
| 申请号： | 201410632029.1 | 申请日： | 2014-11-11 |
| 公开（公告）号： | CN104513832A | 公开（公告）日： | 2015-04-15 |
| 发明（设计）人： | 欧文斌;房友荣;施思;孟凡国;李海龙;刘丽 | 申请（专利权）人： | 浙江理工大学;嘉兴博泰生物科技发展有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85 |
| 代理公司： | 杭州九洲专利事务所有限公司 33101 | 代理人： | 翁霁明 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 一种磷酸钙转HEK293T细胞的方法，该方法包含如下步骤：a.按合适的浓度将HEK293T细胞接种于培养皿，当细胞贴壁完全，长至50％-80％即可开始转染；b.转染前1h换液，用新鲜的完全培养基置换旧的培养基；c.在圆底无菌管中，再加入无菌水，混匀；d.将2×HBS缓冲液与100×PO4混合后，加入上述含DNA-CaCl2溶液的圆底透明管中；e.马上将混合溶液逐滴均匀加入HEK293T细胞中；f.磷酸钙-DNA沉淀加入HEK293T细胞后，再加入转染促进剂处理细胞；g.3-6h后，吸去培养基与DNA沉淀，用1×PBS溶液洗2遍，然后换上新鲜培养基；16-48h后通过荧光观察计算其转染效率。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 磷酸钙 转染 hek293t 细胞 方法 | ||
【主权项】：
一种磷酸钙转染HEK293T细胞的方法，其特征在于该方法包含如下步骤：a.按合适的浓度将HEK293T细胞接种于培养皿，在含5％CO2的37℃温箱中培养8‑24h，当细胞贴壁完全，长至50％‑80％即可开始转染；b.转染前1h换液，用新鲜的完全培养基置换旧的培养基；c.在圆底无菌管中，将GFP质粒与2.5M CaCl2溶液混合，再加入无菌水，混匀；d.将2×HBS缓冲液与100×PO4混合后，加入上述含DNA‑CaCl2溶液的圆底透明管中；将该管垂直放在混匀器上，涡旋混匀；e.马上将混合溶液逐滴均匀加入HEK293T细胞中，边加边轻轻晃动混匀；f.磷酸钙‑DNA沉淀加入HEK293T细胞后，再加入转染促进剂处理细胞，将细胞置于5％CO2的37℃温箱中培养；g.3‑6h后，吸去培养基与DNA沉淀，用1×PBS溶液洗2遍，然后换上新鲜培养基；继续将HEK293T细胞放在温箱总培养，16‑48h后通过荧光观察计算其转染效率。
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