[发明专利]肠道病毒EV71型VP1基因病毒样颗粒及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种肠道病毒EV71型VP1基因病毒样颗粒及其制备方法和应用，属于免疫技术领域。为了实现此病毒样颗粒的制备，本发明首先构建了一种SIV GP41与EV71 VP1融合基因cVP1的真核表达载体，证实cVP1能够在哺乳动物细胞中表达并能够在细胞膜上表达。本发明进一步构建cVP1基因、gag基因的重组杆状病毒转座载体，制备杆状病毒，以两种杆状病毒共感染细胞的方式成功制备cVP1病毒样颗粒，此新型病毒样颗粒制备过程简单，易纯化，所获病毒样颗粒结构均一并在小鼠体内发挥较强的免疫原性。本发明通过膜锚定型融合基因的设计，利用杆状病毒表达系统制备了一种高效表达膜锚定VP1基因的病毒样颗粒。

主权项

一种肠道病毒EV71型VP1基因病毒样颗粒，其特征在于，该病毒样颗粒是将cVP1融合基因克隆到真核表达载体及杆状病毒转座载体中得到cVP1融合基因重组转座载体和cVP1融合基因真核表达载体；将gag基因克隆到杆状病毒转座载体中，得到gag基因重组转座载体；用cVP1融合基因的真核表达载体转染哺乳动物细胞，检测其表达后，再用cVP1融合基因重组转座载体和gag基因重组转座载体制备cVP1和gag的杆粒，将杆粒转染TN5昆虫细胞，经分泌表达制得；其中，所述cVP1融合基因是以重叠PCR法获得的SIV GP41与EV71VP1的融合基因，且cVP1融合基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。