[发明专利]一种马秋波病毒非诊断性的免疫学检测方法

摘要

本发明公开了一种马秋波病毒的免疫学检测方法，该方法步骤如下：根据马秋波病毒基因序列S片段设计特异性引物；逆转录PCR扩增马秋波病毒S片段上的开放阅读框架，PCR产物；将上述PCR产物与TOPO质粒连接，构建重组质粒，并在大肠杆菌的化学感受态细胞中进行转化，筛选出阳性克隆；将阳性克隆在培养基中培养，分离出转化后的质粒，经IPTG诱导表达出目的蛋白，以该目的蛋白为抗原，采用免疫学检测方法检测待测样本中是否含有马秋波病毒。本发明采用免疫学方法实现了对马秋波病毒的可靠而有效的检测，对科研和人民的生命健康具有重大意义。

主权项

一种马秋波病毒非诊断性的免疫学检测方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：(1)根据马秋波病毒基因序列的S片段设计特异性引物；(2)以马秋波病毒的RNA为模板，加入所述特异性引物，经逆转录合成cDNA，并以所述cDNA为模板，利用PCR扩增马秋波病毒S片段上的开放阅读框架，经酶切、纯化，得到PCR产物；(3)将上述PCR产物与TOPO质粒连接，从而构建重组质粒pET100，并在大肠杆菌的化学感受态细胞中进行质粒的转化，培养，经菌落PCR筛选出阳性克隆；(4)将所述阳性克隆接种到新鲜的LB培养基中，培养后分离出转化后的质粒，经IPTG诱导表达，以收集的目的蛋白作为抗原，采用免疫学检测方法检测待测样本中是否含有马秋波病毒；其中，步骤(1)中设计的所述特异性引物的序列为：上游引物NP of Machupo virus‑F：5'‑TTACAGTGCAAAGGCTGCCTTGGGTAGAAATAGAA‑3'；下游引物NP of Machupo virus‑R：5'‑TGGCTCACTCCAAGGAAATTCCCAGCTTTCGGTGGACTCA‑3'。