[发明专利]一种棘白菌素B微生物酶转化方法

摘要

本发明公开了一种棘白菌素B微生物酶转化方法，具体涉及棘白菌素B转化为棘白菌素B母核的方法。包括在微生物发酵生成棘白菌素B脱酰酶后提取粗酶，然后通过分批添加粗酶及棘白菌素B的方式进行转化。本发明方法的摩尔转化率高，产物浓度高，利于分离纯化，且棘白菌素B底物利于回收再利用，降低了生产成本。

主权项

1.将棘白菌素B转化成棘白菌素B母核的方法，包括以下步骤：1)、发酵能将棘白菌素B脱酰酶表达在胞外的基因工程菌，获得棘白菌素B脱酰酶；2)、发酵完成后，将发酵液过滤或离心，得到上清液，向上清液中加入上清液体积的40％～80％(w/v)重量的非重金属盐，搅拌2～8小时，过滤或离心收集沉淀，得到粗酶；3)、将棘白菌素B溶于甲醇、乙醇或二甲亚砜中，得到质量浓度为5～15％的棘白菌素B溶液；4)、将步骤3)制备的棘白菌素B溶液和步骤2)制备的粗酶分别分批加入到磷酸盐缓冲液中，搅拌，使棘白菌素B转化为棘白菌素B母核，监测转化体系中棘白菌素B及棘白菌素B母核浓度，当棘白菌素B浓度不再减少，棘白菌素B母核浓度不再增加时，结束转化，其中，步骤4)加入到磷酸盐缓冲溶液中的棘白菌素B的初始量为反应溶液体积的0.1％～0.4％(w/v)；加入到磷酸盐缓冲溶液中粗酶的初始量为转化反应溶液体积的1％～4％(w/v)。