[发明专利]一种二联灭活疫苗制备方法

摘要

本发明提供了一种二联灭活疫苗制备方法，本发明制备的二联灭活疫苗用于预防猪O型口蹄疫、猪圆环病毒2型，本发明制备方法简单，疫苗的抗原含量高，免疫方便，与现有技术中的分次免疫相比，减少了免疫次数，减少了应激反应，降低了免疫成本。其次，通过二联疫苗与单价疫苗免疫仔猪的效力比较发现，两种抗原成分在同一针二联疫苗中不仅相互没有干扰，而且二联疫苗单次注射仔猪的免疫效果高于两种单苗先后注射的免疫效果。

主权项

一种二联灭活疫苗制备方法，其特征在于包括以下步骤：1)取PCV2ZJ/C毒株感染宿主细胞进行病毒扩增，确保病毒效价≥10^7.0TCID₅₀/ml，收获细胞毒液；2)将步骤1)得到的细胞毒液，利用中空纤维滤柱进行澄清浓缩处理；3)将步骤2)浓缩处理后的病毒在搅拌状态下按0.1～0.3％(v/v)的比例加入β‑丙内酯灭活，得到第一抗原原液；4)取pET28a‑FMDV VP1菌株进行培养扩增，而后向培养体系中加入0.1～1mmol/L的IPTG进行诱导，诱导时间为4～6h，诱导温度为25～37℃，而后收集菌体，破壁，收集包涵体；5)利用CAPS裂解液或尿素裂解液以15～25mg/mL的浓度重悬步骤4)得到的包涵体，收集上清液，再用Ni²⁺柱纯化蛋白，复性蛋白，再过滤除菌，即得到第二抗原原液；6)将步骤3)得到的第一抗原原液与步骤5)得到的第二抗原原液按比例混合，即得到混合抗原原液，上述按比例是确保得到的混合抗原原液中PCV2含量为10^7.0TCID50/头份、FMDV VP1蛋白含量为80μg/头份或PCV2蛋白含量为10^7.5TCID50/头份、FMDV VP1蛋白含量为100μg/头份；7)将步骤6)得到的混合抗原原液与疫苗佐剂搅拌混匀，即得到一种二联灭活疫苗。