[发明专利]一种分离、纯化金钗石斛原生质体的方法和专用试剂配方

摘要

一种分离、纯化金钗石斛原生质体的方法和专用试剂配方。专用试剂溶液A和溶液B，A由MES、KCl、Mannitol、CellulaseR10、PectolyaseY-23、MacerozymeR-10、BSA、CaCl₂和ddH₂O。溶液B由MES、KCl、Mannitol、BSA、CaCl₂、ddH₂O。该试剂制备原生质体步骤：（1）将金钗石斛植株放黑暗处培养12h，取幼嫩饱满叶片无菌处理后剪碎；（2）在摇床上用溶液A黑暗处理（1）碎片释放出原生质体；（3）将（2）获得的原生质体溶液过200目细胞筛过滤，滤液离心2-8min，用溶液B溶解沉淀物，反复离心；（4）用FDA对（3）纯化的原生质体活力检测。用本法制的原生质体密度大、纯度高、活力强。

主权项

一种分离、纯化金钗石斛原生质体的专用试剂配方，其特征在于：专用试剂溶液A和溶液B， A由MES、KCl、Mannitol、Cellulase R10、Pectolyase Y‑23、Macerozyme R‑10、BSA、CaCl₂和ddH₂O；溶液B由MES、KCl、Mannitol、BSA、CaCl₂、ddH₂O；溶液A成分及含量以10 ml如下：所述试剂溶液A各成分浓度为：MES 0.2 mol/L，Mannitol 0.30‑0.95 mol/L，KCl 0.08 mol/L，CaCl₂ 0.10‑0.30 mol/L；溶液B成分及含量以10ml如下：  所述试剂溶液B各成分浓度为：MES 0.2 mol/L，Mannitol 0.30‑0.95 mol/L，KCl 0.08 mol/L，CaCl₂ 0.10‑0.30 mol/L。