[发明专利]一种从禾本科作物感病组织上直接提取病原菌DNA的方法在审
| 申请号： | 201410674584.0 | 申请日： | 2015-08-04 |
| 公开（公告）号： | CN104498474A | 公开（公告）日： | 2015-07-29 |
| 发明（设计）人： | 董丽英;杨勤忠;刘树芳;徐鹏;李静 | 申请（专利权）人： | 云南省农业科学院农业环境资源研究所 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;C12Q1/68;C12Q1/04 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人： | 向庆宁 |
| 地址： | 650203 云*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明提供一种从发病的水稻和玉米等禾本科的叶片病斑上直接提取病原真菌和细菌DNA的方法。采用本发明的方法可以从感染稻瘟病的水稻叶片、穂颈及玉米叶片病斑上直接提取病原菌的DNA，提取方法简单、快速、成本低，提取的DNA适用于病原微生物的分子检测与诊断、病原菌的无毒基因检测以及群体遗传多样性等基于PCR技术的分析。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 禾本科 作物 组织上 直接 提取 病原菌 dna 方法 | ||
【主权项】：
一种从禾本科作物感病组织上直接提取病原菌DNA的方法，该方法包括：(1)、提前分别配制以下四种试剂，灭菌后备用：(1)100mM TrisHCl(pH8.7)、(2)10mM EDTA(pH 8.0)、(3)1M KCl和(4)10％Tween 20；(2)、采集待检测的禾本科作物感染病害的叶片或其它组织作为样品，从发病的禾本科作物的叶片病斑上切取约2mm×2mm大小的叶片放置于PCR‑96孔板中；(3)、根据样品的数量，将步骤(1)中的100mM TrisHCl(pH8.7)、10mM EDTA(pH8.0)和1M KCl各取适量等体积混合后，然后再根据3种混合液的总体积按1000:1的量加入10％的Tween 20；最后混合均匀后,在预先放入样品的PCR‑96孔板中每孔各加入100μL提取液；(4)、将步骤(3)处理好的样品放入PCR仪，95℃加热处理10min，取出样品放置于‑20℃备用，或将样品放入湿热灭菌锅，在105℃下处理10min，取出样品放置于‑20℃备用。
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