[发明专利]一种饲料用纤维植物产品中粗蛋白含量的测定方法

摘要

一种饲料用纤维植物产品中粗蛋白含量的测定方法，采用分光光度法检测纤维植物产品中粗蛋白含量，快速方便，操作简单，结果准确，RSD为2.35％，加标平均回收率99.3％，检出限为0.1μg/mL。该测定方法为检测饲料用纤维植物产品粗蛋白含量提供了一种便于实施的有效方法，能满足纤维植物产品饲料用等综合开发研究的需要。

主权项

一种饲料用纤维植物产品中粗蛋白含量的测定方法，其特征在于，包含以下步骤：(1)试剂配制：配制浓硫酸‑双氧水混合液：由质量分数为98％的浓硫酸与质量分数为30％的双氧水混合而成，浓硫酸与双氧水的体积比为5∶3；配制乙酸钠‑乙酸缓冲溶液：量取60mL物质的量浓度为0.5mol/L的乙酸钠溶液与40mL物质的量浓度为0.5mol/L的乙酸溶液混合，该溶液pH 4.9；配制显色剂：30mL质量浓度为37％的甲醛溶液与15mL乙酰丙酮混合，加水稀释至100mL，振荡混匀，室温下放置72h以上；配制氨氮标准储备溶液：称取硫酸铵0.4720g加水溶解后移于100mL容量瓶中，加水溶解并定容至100mI即得，得到以氮计1000μg/mL氨氮标准储备溶液；配制氨氮标准使用溶液：上述氨氮标准储备溶液稀释20倍得到以氮计50μg/mL的氨氮标准使用溶液；(2)试样消解：取饲料用纤维植物样品，粉碎至细度0.25mm，准确称取粉碎的试样0.2000g～0.3000g，置于100mL消化管中，加入浓硫酸‑双氧水混合液5mL～10mL，盖上透气磨口塞后充分摇匀，放入消化炉加热消化，待消化管中消化液呈清亮透明为止，然后加3～5滴双氧水后重新放入消化炉加热消化直至消化液呈清亮透明，取下已消化好试样的消化管，待冷却后，将消化液移入100mL容量瓶定容，为试样消化液，备用；同时做空白试验，得空白消化液；全程消化时间小于30min；(3)试样溶液与空白试样液的制备：吸取2.00mL～5.00mL试样或试剂空白消化液于100mL容量瓶内，用水稀释至刻度，混匀；(4)标准曲线的绘制：分别吸取0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL的氨氮标准使用溶液，分别置于50mL容量瓶中，加10.0mL乙酸钠‑乙酸缓冲溶液及10.0mL显色剂，加水定容至50mL，混匀，得到0.50、1.00、2.00、4.00、6.00μg/mL的5个质量浓度级别的标准工作溶液和1个试剂空白液；将标准工作溶液及试剂空白液置于100℃水浴中加热10min～15min，取出，用水冷却至室温后，移入1cm比色杯内，以试剂空白液为参比，于波长425nm处测量吸光度值；以氮的质量浓度为纵坐标，相应吸光度值为横坐标，绘制标准工作曲线；经拟合得到标准曲线方程：ρ(μg/mL)＝‑0.059+8.569A，相关决定系数R²＝0.9997；(5)试样测定：吸取2.00mL～5.00mL试样溶液于50mL容量中；按步骤(4)操作，试样吸光度值与标准曲线代入步骤(6)中线性回归方程求出质量浓度ρ(μg/mL)；(6)结果计算：粗蛋白含量以质量分数w计，数值以百分率(％)表示，按下列公式进行计算：$w=\frac{{\mathrm{\ρv}}_1}{m\×\frac{v_3}{v_2}\×\frac{v_5}{v_4}\×{10}^4}\×F$式中：ρ‑试样测定显色液质量浓度，单位为微克(μg/mL)；v₁‑试样显色液定容体积，单位为毫升(mL)；v₃‑制备试样溶液的消化液体积，单位为毫升(mL)；v₂‑消化液定容体积，单位为毫升(mL)；v₄‑试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；v₅‑测定用试样溶液体积，单位为毫升(mL)；m‑试样质量，单位为克(g)；F‑氮换算为粗蛋白的系数，纤维植物产品试样F为6.25。