[发明专利]一种转化芽孢杆菌的方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体为一种转化芽孢杆菌的方法。该方法首先诱导芽孢杆菌进入可被转化的状态，再与含有重组质粒的大肠杆菌进行共培养，期间添加多粘菌素，杀死大肠杆菌，释放出质粒。共培养之后的菌株再涂布到对应抗生素平板上进行筛选，得到被转化的菌株。该转化方法操作简单，不需要特殊的设备；不仅可用于枯草芽孢杆菌的模式菌株的转化，还可用于野生型菌株的枯草芽孢杆菌转化和其它芽孢杆菌属的细菌转化，适应性广。

主权项

一种转化芽孢杆菌的方法，其特征在于包括以下步骤：（1）、将待转化菌株划线接种到LB平板上，于37℃的条件下培养16‑24h；将含有待转化质粒的大肠杆菌划线接种到含有对应抗生素的LB平板上，37℃下生长16‑24h；（2）、挑取步骤（1）中待转化菌株的单菌落接种到玻璃试管中，每支玻璃试管含有3ml MA培养基，于37℃，200rpm下培养15‑18h，得待转化的菌株；将步骤（1）中的大肠杆菌接种到玻璃试管中，每管含有对应抗生素的LB培养基4‑6ml，于37℃，200rpm下培养16‑22h；（3）取步骤（2）中待转化的菌株300ul，接种到2.7ml MA培养基中，然后置于玻璃试管中，37℃，200rpm培养3h；（4）取步骤（3）中的待转化菌株，然后稀释2‑20倍接种到MB培养基中，终体积为3ml，置于玻璃试管中，30℃‑37℃，200rpm下培养90min；MB培养基由以下成分构成：1×MA base，1×MA salt，1%体积的50%的葡萄糖溶液，0.5mM氯化钙，2.5mM氯化镁；其中MA base和MA salt以10×母液配制，4℃保存；氯化钙、氯化镁以100×母液配制，4℃保存；（5）取步骤（2）中含有质粒的大肠杆菌菌液，13400×g离心1min，去上清，用MB培养基洗涤两次，去除残余的抗生素；（6）在步骤（5）中的大肠杆菌中加入0.2‑1倍原始体积的步骤（4）中的待转化菌液，终体积1ml，加入终浓度为5‑30mg/L多粘菌素B，正常筛选浓度的1/50‑1/10的对应抗生素，置于玻璃试管中，37℃，200rpm培养30‑90min；（7）取步骤（6）中的菌液200‑500ul，涂布于含有5‑30 mg/L多粘菌素B以及含对应抗生素的平板上，培养20‑40h，挑取生长的单菌落进行鉴定，得到转化的芽孢杆菌；步骤（2）中所述的MA培养基由以下成分构成：2×MA base，1×MA salt，1%体积的50%的葡萄糖溶液，其中MA base和MA salt以10×母液配制，4℃保存。