[发明专利]基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法

摘要

基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法，是采用HPLC-FTICR-MS，寻找猪皮明胶酶解混合物的特征性质谱峰；通过同位素标记技术对特征峰进行标记，实现质谱峰的质荷比偏移，以同位素标记后的特征性质谱峰为内标，借助特征峰偏移前后的峰强度的不同，准确计算猪皮明胶添加量。本发明FTICR-MS具有的高分辨率特性，能准确地判断可作为猪皮明胶定量检测的特征峰，提供了猪皮明胶定量检测的前提；利用同位素标记技术和HPLC-FTICR-MS能有效定量检测猪皮明胶添加量，误差范围在10%以内，可为相关部门监控食品提供依据；用胰蛋白酶酶解溶于H₂¹⁸O中的猪皮明胶，可一步完成蛋白质酶解过程和多肽的¹⁸O标记过程，缩短了猪皮明胶定量检测所需的时间。

主权项

一种基于质谱和同位素标记建立的定量检测猪皮明胶的方法，其特征是：A、溶液的配制（1）碳酸氢氨溶液的配制：分别用H₂¹⁶O和H₂¹⁸O配制碳酸氢氨溶液；（2）酶的配制：分别用H₂¹⁶O和H₂¹⁸O配制胰蛋白酶溶液；（3）猪皮明胶溶液的配制：用H₂¹⁶O和H₂¹⁸O配制碳酸氢氨溶液溶解猪皮明胶，分别得到溶于H₂¹⁶O和H₂¹⁸O的猪皮明胶溶液；B、同位素标记（1） 加酶：将H₂¹⁶O配制的胰蛋白酶加入H₂¹⁶O配制的猪皮明胶中，将H₂¹⁸O配制的胰蛋白酶加入H₂¹⁸O配制的猪皮明胶中；（2）酶解和标记：酶解和标记过程同时进行；（3）终止反应；C、HPLC‑FTICR‑MS检测（1）标记物和未标记物的混合：以H₂¹⁸O中的猪皮明胶水解物为内标与H₂¹⁶O中的猪皮明胶水解物进行混合；（2）上样检测：混合样品注射进入于FTICR‑MS设备连接的HPLC中，对经过HPLC分离的猪皮明胶水解物进行检测，上样量为0.5‑20 μg；D、数据分析：（1）根据氨基酸序列，寻找猪皮明胶的特征峰；（2）分析并记录特征峰在标记前后的峰强度；（3）定量方法的准确性分析：通过比较标记物/未标记物即¹⁸O/¹⁶O的计算值与实际混合比例检验定量方法的准确性，¹⁸O/¹⁶O按照如下公式计算：其中，I₀, I₂ 和 I₄分别代表未标记即¹⁶O的特征肽在实验中测得的单一同位素峰强度，质量高2Da的峰强度和质量高4Da的峰强度；M₀, M₂ 和 M₄分别代表未标记即¹⁶O的特征肽在理论上的单一同位素峰强度，质量高2Da的峰强度和质量高4Da的峰强度。