[发明专利]一种人外周血单个核细胞的分离方法

摘要

本发明公开了一种人外周血单个核细胞的分离方法，结合了羟乙基淀粉沉淀法和Ficoll密度梯度离心法两种方法的优点，针对大容量血液样本的分离特点，先用羟乙基淀粉沉淀法去除大部分的红细胞，然后在空气中自然沉降，再用Ficoll密度梯度离心法对单个核细胞进行进一步纯化，从而得到纯度超过95％，活力超过85％的PBMC。相比没有在空气中自然沉降的方法，获得的细胞活力和纯度更高。

主权项

一种人外周血单个核细胞的分离方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)将外周血离心后，上层为血浆，下层为血细胞沉淀；(2)在下层血细胞沉淀中加入等体积的羟乙基淀粉溶液，羟乙基淀粉溶液的浓度为4％‑10％g/mL，混合均匀后在空气中自然沉降15～35min；(3)将上清液缓慢转移至Ficoll淋巴细胞分离液表面，离心力为600g～800g,离心20～30min；(4)离心后从下到上分为4层，依次为红细胞和粒细胞层、淋巴细胞分离液层、白膜层和血浆层；吸取白膜层，重悬，离心；(5)离心后弃上清液，用1640培养基重悬细胞，调整细胞密度为5×10⁵～10×10⁵cells/mL,得到人外周血单个核细胞。