[发明专利]一种高产间苯三酚的基因工程菌及其构建方法与应用

摘要

本发明公开了一种高产间苯三酚的基因工程菌及其构建方法与应用，属于基因工程技术领域。本发明所提供的基因工程菌是过表达如SEQ ID NO.1所示的碳存储调节因子基因CsrB，并共表达聚酮合成酶基因phlD、多重抗性激活因子基因marA、乙酰CoA羧化酶基因ACCase。同时，本发明还提供了高产间苯三酚的基因工程菌的构建和应用方法。本发明所提供的基因工程菌首次实现在转录后水平通过全局性调控碳代谢的方式来提高间苯三酚产量，间苯三酚的产量提高了115.6％，具有较高的工业应用价值。

主权项

一种高产间苯三酚的基因工程菌，其特征在于，是过表达如SEQ ID NO.1所示的碳存储调节因子基因CsrB，并共表达聚酮合成酶基因phlD、多重抗性激活因子基因marA、乙酰CoA羧化酶基因ACCase；所述聚酮合成酶基因phlD，来源于荧光假单胞菌，Genebank ID：11830552；所述多重抗性激活因子marA，来源于大肠杆菌，Genebank ID：6060688；所述乙酰CoA羧化酶基因ACCase，来源于大肠杆菌，其中，亚基accA的Genebank ID：6062185，亚基accB的Genebank ID：6058890，亚基accC的Genebank ID：6058863，亚基accD的Genebank ID：6059083，所述基因工程菌是通过下述方法构建获得的：1)将T7启动子的序列插入到出发菌株的碳存储调节因子CsrB基因序列前，获得突变菌株；所述T7启动子来自于表达载体pETDue1，序列如SEQ ID NO.2所示；所述出发菌株，是大肠杆菌；所述碳存储调节因子CsrB基因序列如SEQ ID NO.1所示；2)制备步骤1)所得突变菌株的感受态细胞；3)构建含有聚酮合成酶基因phlD、多重抗性激活因子marA、乙酰CoA羧化酶基因ACCase的重组质粒；4)将步骤3)所得的重组质粒导入到步骤2)所得的感受态细胞中，获得重组细胞。