[发明专利]一种水体游离基因污染物的浓集回收方法

摘要

本发明公开了一种水体游离基因污染物的浓集回收方法，包括如下步骤：(1)核酸吸附颗粒的制备；(2)洗脱液的配制；(3)将核酸吸附颗粒装入过滤柱中；将待测水样流过过滤柱后，再用洗脱液流过过滤柱，收集流出的游离基因污染物为一次浓集液；在无菌条件下，将一次浓集液除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇或异丙醇并静置，离心收集沉淀；用无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；本发明操作简便，不需要任何仪器设备；处理水样体积大；浓集回收基因污染物的效率高；明显提高水环境中耐药基因和转基因成分等游离基因污染物的检测灵敏度，回收率高，为饮水安全提供保证。

主权项

一种水体游离基因污染物的浓集回收方法，其特征是包括如下步骤：(1)核酸吸附颗粒的制备：按比例，将12.6g的氯化铝缓慢加入至2L去离子水中，充分溶解后，加入2mol/L的碳酸钠水溶液90ml，混匀，调节pH＝7.2，形成凝胶；静置6～12h，除去上清，用0.14mol/L的NaCl水溶液洗涤凝胶2次后，再加入0.14mol/L的NaCl水溶液至2L，得到含水氢氧化铝凝胶，灭菌；将粒度在60～100目的层析用硅胶，经过蒸馏水淘洗除去漂在水面上的颗粒后，灭菌，按每300g灭菌后层析用硅胶加入0.5‑1L含水氢氧化铝凝胶的比例，使灭菌后层析用硅胶浸透混匀，烤干，得到核酸吸附颗粒；(2)洗脱液的配制：将15g氯化钠、30g胰蛋白胨、15g牛肉粉和3.75g甘氨酸加水至1L，用0.1M氢氧化钠水溶液调节pH至9；(3)将所述核酸吸附颗粒装入长与直径比为5‑35的过滤柱中并至过滤柱高度的2/3处；将待测水样以300‑50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱后，再用洗脱液以40‑50毫升/分钟的速度匀速流过过滤柱，用灭菌容器收集流出的洗脱液，即为游离基因污染物的一次浓集液；在无菌条件下，利用注射器将一次浓集液通过孔径为0.45微米的无菌滤器以除去细菌；除菌后的滤过液加入等体积无水乙醇或异丙醇并静置0.5‑2小时后，离心收集沉淀；用2.5‑50毫升的无菌双蒸水溶解沉淀，即为游离基因污染物的最终浓集液；所述待测水样与洗脱液的体积比为100：1‑5。