[发明专利]一种运用花粉管通道转化技术培育耐盐水稻的方法

摘要

本发明公开一种运用花粉管通道转化技术培育耐盐水稻的方法，包括以下步骤：(1)提取芦苇叶片DNA；(2)外源DNA的导入受体水稻；(3)发芽期的盆筛；(4)人工盐池筛选和大田选育；(5)稳定株系在盐滩田间种植。本发明运用花粉管通道技术，将盐生植物的总DNA转移到普通水稻，实现超远缘遗传物质的转移，省略了组织培养过程，避免了植物组织培养过程中可能产生的各种无法预测的不利影响，能同时导入多个基因，达到耐盐植物分子育种的目的。

主权项

一种运用花粉管通道转化技术培育耐盐水稻的方法，包括以下步骤：(1)提取盐生植物叶片DNA作为供体；(2)取水稻9311、盐恢559、7海76、7海74作为受体，在盛花期选择正在开花的稻穗，去除未开过的颖花和已开过的颖花，每穗只留下当天刚开的颖花约20朵；1.5～2.0小时后剪去小穗内颖，并将1/3～1/2的花柱连同柱头一起剪去；立即用微量注射器在刚剪去柱头的花柱切面上滴注含芦苇DNA溶液2～3μl；注射时间为水稻开花后1～3小时进行，芦苇DNA溶液浓度是100～500μg/ml，导入量是10‑20μl，套上杂交袋以防止水份蒸发，25～30天后收获D0代种子；(3)收获的D0代种子全部播种，经观察，各导入系基本无变异或变异不明显，分别全收各株的种子为D1代种子；(4)将D1代种子分为两组，第一组在含盐分浓度为5‰的塑料盆中进行种子发芽和育苗，对种子进行耐盐性筛选，选留健壮幼苗移栽到普通无盐大田，进行常规栽培，观察变异情况，选留生长正常的单株收种；第二组种子则种植于普通水田内发芽和育苗以及全过程生长，选留变异株，进行单株收种；盐筛和非盐筛所选留的各单株收种称为D2代种子；(5)将收获的D2种子再在盐池盐度为4‰～5‰的条件下进行耐盐性筛选，以未导入外源DNA的受体作为对照，进行水稻生长的耐盐性和产量品质性状的筛选鉴定，筛选生长正常的单株，收获D3代种子；(6)将收获的D3代种子在盐池盐度为4‰～5‰的条件下进行耐盐性筛选，以未导入外源DNA的受体作为对照，进行水稻生长的耐盐性和产量品质性状的筛选鉴定，筛选生长正常的单株，收获D4代种子；(7)在盐池盐度为5‰的条件下进行多代筛选，直至D6代植株基本稳定；(8)同时，培育出与双8S/海湘4号C815S杂交获得F1代植株；(9)将收获的D6代株系的种子与获得的F1代单株种子分别在盐分为2‰和4‰、6‰不同梯度的江苏盐城滩涂盐地中进行田间试种，以未导入外源DNA的受体作为对照，选育出耐盐性高、生长好、产量高的新品种或新品系，；(10)次年，将新品系或新品种在盐分为3‰‑4‰的江苏盐城滩涂盐地中进行50亩“耐盐水稻高产示范区”中展示，以未导入外源DNA的受体作为对照，进行水稻生长的耐盐性和产量品质性状的筛选鉴定。