[发明专利]一种从大肠杆菌中提取纯化SOD的方法

摘要

本发明涉及一种提取纯化SOD的方法，尤其涉及一种从大肠杆菌中提取纯化SOD的方法；其包括下述操作步骤：菌体收集、菌体匀浆、粗酶液制备、超滤、层析以及脱盐。本发明可有效纯化非修饰的SOD蛋白，保持SOD的原始活性；且纯化出的高纯度SOD用邻苯三酚氧化法测得的比活高达13000U/g，整个过程收率较高；操作简单、可实现工业化大生产。

主权项

一种从大肠杆菌中提取纯化SOD的方法，其特征在于其包括下述操作步骤：1）菌体收集：采用离心法收集湿大肠杆菌细胞；2）菌体匀浆：将上述大肠杆菌细胞中加入2~30倍体积的水，搅拌使大肠杆菌均匀分散为悬浮液，用高压均质机在100~1500bar匀浆2~8次；3）粗酶液制备：向匀浆后产物加入pH7~9的聚醚酰亚胺溶液，使聚醚酰亚胺的终浓度为0.5~25g/L；搅拌均匀后加入硅藻土，硅藻土的加入量为每升克；混合均匀后用板框过滤器过滤收集滤液，即为SOD粗酶液；或将匀浆后产物以10000~16000rpm离心，上清液用陶瓷膜微滤系统过滤得到SOD粗酶液；4）超滤：将上述SOD粗酶液用1000~40000 Da超滤膜处理，超滤膜两侧压力不大于0.4MPa；5）层析：将上述超滤后所得滤液通过阳离子层析柱层析，用去离子水冲洗后用5~70mM的pH4.0~9.0磷酸缓冲溶液进行洗脱，收集富含SOD的洗脱液；所述阳离子层析柱选自Q‑sepharose或DEAE‑sepharose层析填料；6）脱盐：将上述富含SOD的洗脱液通过超滤或凝胶排阻层析脱盐。