[发明专利]一种检测淀粉样多肽聚集及其聚集抑制剂评估的方法

摘要

本发明涉及淀粉样多肽，特指一种检测淀粉样多肽聚集及其聚集抑制剂评估的方法。该方法利用石英晶体微天平(QCM)能检测质量微小变化的优势，将淀粉样蛋白（多肽）及其淀粉样蛋白（多肽）与聚集抑制剂分子混合溶液在石英晶体微天平的芯片表面上孵育，经过一定时间后，淀粉样蛋白（多肽）将在芯片表面集聚，引发石英晶体微天平信号，由石英晶体微天平产生信号强弱可判断多肽聚集抑制剂分子的抑制作用，另外结合原子力显微镜（AFM）表征可以对QCM结果进行确认，综合两种测量方法综合评估淀粉样多肽抑制剂效果。

主权项

一种检测淀粉样多肽聚集及其聚集抑制剂评估的方法，其特征在于具体步骤如下：将淀粉样多肽充分溶解分散在六氟异丙醇中得到溶液A，对溶液A进行干燥，干燥后的淀粉样多肽使用去离子水进行溶解，配置成浓度为250‑1000 μg/mL的淀粉样多肽水溶液，称为溶液B；得到QCM共振频率基线后，取上述溶液B溶液通入石英晶体微天平传感器中，随着多肽分子在芯片表面的吸附集聚，QCM频率信号和能量耗散将发生改变，检测到的信号作为抑制剂组的阳性对照B；将浓度为10‑200μg/mL的聚集抑制剂的水溶液称为溶液C，在得到QCM共振频率基线后，将溶液C通入QCM传感器得到的QCM 频率和能量耗散信号作为聚集抑制剂评价的阴性对照C使用；在得到QCM共振频率基线后，将待评价的淀粉样多肽水溶液和抑制剂水溶液混合得到混合溶液D，混合溶液D中淀粉样多肽的浓度与前述阳性对照——溶液B的浓度一致，抑制剂分子的浓度与阴性对照——溶液C的浓度一致；将混合液D所得到的QCM能量频率信号与阳性对照B及阴性对照C进行比较，QCM 频率信号下降的数值越大，证明在表面上集聚的多肽越多；如果：阴性对照组的频率变化>抑制剂组的频率变化>阳性对照组的频率变化，说明该抑制剂对于多肽集聚具有抑制效果。