[发明专利]一种鸭瘟病毒基因缺失转移载体及其应用

摘要

本发明目的在于提供一种鸭瘟病毒基因缺失转移载体及其应用，该转移载体通过与鸭瘟病毒发生同源重组，从而获得鸭瘟病毒基因缺失工程毒株，利用该毒株可制备一种安全性高、防制效果好的鸭瘟病毒基因缺失疫苗。本发明制备的鸭瘟病毒基因缺失疫苗在降低病毒致病性的情况下，不会影响病毒的免疫原性，因而制备的鸭瘟病毒基因缺失疫苗具有更好的安全性，能够保持原有病毒的免疫原性，适合我国当前鸭瘟疾病的预防控制，有利于鸭场鸭瘟的净化处理。而且本发明的重组鸭瘟病毒株不含任何外源基因，与现有技术报道的同类鸭瘟病毒基因疫苗相比，不含有EGFP、lacZ等标记基因，具有更高的生物安全性。

主权项

一种鸭瘟病毒基因缺失转移载体，其特征在于，所述的转移载体是由如下步骤构建：1)以鸭瘟病毒为模板，利用序列为SEQ ID NO:1和序列为SEQ ID NO:2的引物对进行PCR扩增，回收扩增片段，并连接入载体构成质粒pMD‑gI‑L；用序列为SEQ ID NO:3和序列为SEQ ID NO:4的引物对进行PCR扩增，回收扩增片段，并连接入载体构成质粒pMD‑gE‑R；2)将pMD‑gI‑L用Bgl II与BamH I进行双酶切，回收纯化片段克隆至已用Bgl II限制性内切酶进行酶切并回收的pLS‑lacZ载体上，正向连接构建成pgI‑lacZ质粒；应用限制性内切酶Xho I与Pst I分别对质粒pgI‑lacZ和pMD‑gE‑R进行双酶切，回收纯化片段进行连接，制成鸭瘟病毒基因缺失转移载体pgIE‑lacZ。