[发明专利]一种三代虫纯种人工感染系统的建立方法

摘要

本发明属于水产病害防治领域，涉及一种三代虫纯种人工感染系统的建立方法，具体涉及一种寄生于金鱼鳃及体表的小林三代虫纯种人工感染系统的建立方法。该方法包括1）获取健康无虫金鱼；2）在健康无虫金鱼上进行三代虫的人工感染；3）三代虫人工感染后维持。本发明提供了一种以金鱼为宿主建立一种可为药物筛选、新鱼药研制等提供动物模型的三代虫纯种人工感染系统的建立方法。

主权项

一种三代虫纯种人工感染系统的建立方法，其特征在于：所述三代虫纯种人工感染系统的建立方法包括以下步骤：1）健康无虫金鱼的获取：1.1）将购买的金鱼暂养在盛有曝气自来水的水族箱中5‑8天；1.2）将经过步骤1.1）后的金鱼用100 mg/L的福尔马林溶液浸泡12 h，连续浸泡3次，每次间隔为2天；1.3）浸泡结束后，将金鱼在曝气自来水中继续养殖，所述养殖时间不低于1周；1.4）随机选取多尾金鱼，用50 mg/L的MS‑222溶液麻醉后，在体视显微镜下观察鱼类的鳃、体表以及鳍条，确认无三代虫，得到健康无虫金鱼；2）三代虫的人工感染：2.1）从已经感染三代虫的金鱼尾鳍上选取1条三代虫；2.2）将步骤2.1）所选取的三代虫置于经步骤1.4）麻醉后的健康无虫金鱼的尾鳍上；2.3）待三代虫附着鳍条之后，将该金鱼养殖在一个隔离的且盛有曝气自来水的玻璃缸中；2.4）养殖时间不低于12 h后，将步骤2.3）中金鱼再次用50 mg/L的MS‑222溶液麻醉，置于体视显微镜下观察金鱼的鳍条是否有三代虫，若有，则进行步骤2.5）；若无，则返回执行步骤2.1）至步骤2.4）直至三代虫感染成功后进行步骤2.5）；2.5）将感染成功后的金鱼与步骤1.4）中数量相同的健康金鱼混养，一周后，从混养的金鱼中随机选取一尾，选取其尾鳍上三代虫进行形态学鉴定以及分子鉴定，若经形态学鉴定以及分子鉴定后确认均是同一种三代虫，则将感染三代虫的金鱼与健康无虫金鱼按照1:4的比例混养，以得到更多的感染同一种三代虫的金鱼；若经形态学鉴定以及分子鉴定后确认不是同一种三代虫，则舍弃已感染三代虫的所有金鱼。