[发明专利]基于小球藻的金属硫蛋白制备方法

摘要

本发明提供基于小球藻的金属硫蛋白制备方法，按照下述步骤进行，向小球藻反应器中分别加入锌铜离子进行培养；微孔滤膜浓缩；小球藻常压破壁；叶绿素的提取；金属硫蛋白的提取。金属硫蛋白的来源拓宽到藻类，显著降低金属硫蛋白生产成本；利用小球藻提取金属硫蛋白具有突出优点，生长迅速，积累量大，加工容易；利用本方法提取出金属硫蛋白后的藻干粉可用于制备畜牧业的饲料；先利用乙醇对小球藻内的叶绿素进行提取，降低叶绿素对于金属硫蛋白提取分离过程的影响，提高金属硫蛋白的质量；采用锌、铜交替胁迫诱导制备金属硫蛋白，得到金属硫蛋白的产率高达10g/250kg，纯化后可得到更高纯度的金属硫蛋白。

主权项

基于小球藻的金属硫蛋白制备方法，其特征在于：按照下述步骤进行：步骤1，将培养液置于反应器内，120℃下灭菌，放入小球藻藻种，再置于25℃光照培养箱中，培养12h，然后将反应器置于25℃无光照的培养箱中，培养5h，然后再放入有光照的培养箱中培养12h，如此重复3‑10次，向处于对数生长期的小球藻中加入5‑100μmol/L锌离子溶液，培养24‑120h后，再向经过上述处理后的小球藻中加入5‑100μmol/L铜离子溶液，再培养3‑10天；步骤2，培养3‑10天后，将培养液以及其中的小球藻进行微孔滤膜浓缩，浓缩至原培养液体积的0.2‑0.6％，膜浓缩参数：膜浓缩压力为0.05‑0.09MPa，膜浓缩温度为25‑30℃，得小球藻浓缩液；步骤3，将步骤2中所得的小球藻浓缩液在常温下进行压力破壁，所述常温压力破壁的条件：破壁温度为25℃，破壁压力为300‑500MPa，破壁时间为1‑2h，得到破壁后的混合藻液；步骤4，将步骤3中得到的破壁后的混合藻液用80‑95％的乙醇溶液进行叶绿素的提取，提取温度为55‑65℃，提取时间为5‑7h，提取3‑5次，提取后的混合液经过离心，离心条件：转速为80‑120r/min，离心时间为10‑15min，离心2‑3次，得到叶绿素提取液以及经过脱色的混合藻液；步骤5，将步骤4中经过脱色的混合藻液离心，离心条件：离心转速为1000‑2000r/min，离心时间为10‑15min，离心3‑5次，取上清液，采用葡聚糖凝胶对上述上清液进行层析，洗脱液选用5‑20mmol/L的盐酸提取液，经柱层析之后得到收集液，离心后所得藻泥在50‑60℃下干燥得到藻干粉；步骤6，将上述收集液进行合并，经过真空冷冻干燥之后，用超纯水对其进行溶解，采用脱盐柱对其进行层析，洗脱液采用超纯水，脱盐纯化1‑4次，将所得的洗脱液用超滤膜进行超滤浓缩，浓缩后的滤液在‑40‑‑25℃下进行干燥得到金属硫蛋白。