[发明专利]一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法

摘要

本发明提供了一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法，该方法包括：Ⅰ、中药原料的鉴别：对黄连、枳实、人参、苦参、麦冬、甘草的鉴别；Ⅱ、中药有效成分黄连含量的测定。本发明采用高效液相色谱法与薄层色谱法提供了一种有效的检测方法，可以有效的控制心速宁胶囊的质量，有利于工业化生产。本发明的检测方法科学、可行，有较大的实用价值。

主权项

一种中药制剂心速宁胶囊的检测方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：Ⅰ、中药原料的鉴别：(一)黄连的鉴别：(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物0.5‑1g，研细加甲醇10‑20ml，置水浴中加热回流15‑30分钟，滤过，滤液浓缩至3‑6ml，作为供试品溶液；(2)对照品溶液的制备：取黄连对照药材50mg，加甲醇10m1‑20ml，置水浴中加热回流15‑30分钟，滤过，滤液浓缩至3‑6ml，制成对照药材溶液；(3)盐酸小檗碱对照品溶液的制备：取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为对照品溶液；(4)吸取上述供试品溶液、对照药材溶液和对照品溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯‑乙酸乙酯‑甲醇‑异丙醇‑浓氨试液，体积比为12∶6∶3∶3∶1为展开剂，置氨蒸气预饱和的层析缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点为盐酸小檗碱；(二)枳实的鉴别：(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2‑5g，研细，置50‑100ml圆底烧瓶中，加甲醇20‑40ml，置水浴中加热回流30‑60分钟，滤过，滤液蒸干，残渣用水20ml‑50ml分三次加热溶解，滤过，滤液置分液漏斗中，用0.1mol/L盐酸调节PH至3，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次15ml‑30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇2ml‑5ml使溶解，作为供试品溶液；(2)柚皮苷对照品溶液的制备：取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作为对照品溶液；(3)吸取上述三种溶液各4μl，分别点于同一含0.5％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯‑甲醇‑水，体积比为6∶2∶3的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1％三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯365nm下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的黄色荧光斑点为柚皮苷；(三)人参的鉴别：(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物4‑8g，研细，加三氯甲烷40‑80ml，置水浴中加热回流1‑1.5小时，弃去三氯甲烷提取液，药渣蒸干，加水饱和的正丁醇30‑60ml，超声处理功率250W，频率40kHz 30‑60分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次30‑60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2‑4ml使溶解，作为供试品溶液；(2)人参对照药材溶液制备：取人参对照药材1g，加三氯甲烷40‑80ml，置水浴中加热回流1‑1.5小时，弃去三氯甲烷提取液，药渣蒸干，加水饱和的正丁醇30‑60ml，超声处理功率250W，频率40kHz30‑60分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，用氨试液洗涤2次，每次30‑60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2‑4ml使溶解，制成对照药材溶液；(3)人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rg1对照品溶液制备：取人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rg1对照品，分别加甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；(4)吸取上述四种溶液各10μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷‑甲醇‑水，体积比为13∶7∶2，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10﹪硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，Rf值偏小的为人参皂苷Re，Rf值偏大的为人参皂苷Rg1；(四)苦参的鉴别：(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2‑4g，研细，置50‑100ml具塞瓶中，加0.1mol/L盐酸30‑60ml，放置15分钟，混匀，滤过，滤液移至分液漏斗中，用1mol/L氢氧化钠溶液调PH至10，加氯化钠使饱和，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15‑30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml‑2ml使溶解，作为供试品溶液；(2)苦参对照药材溶液制备：取苦参对照药材0.5g，置50‑100ml具塞瓶中，加0.1mol/L盐酸30‑60ml，放置15分钟，混匀，滤过，滤液移至分液漏斗中，用1mol/L氢氧化钠溶液调PH至10，加氯化钠使饱和，用三氯甲烷振摇提取2次，每次15‑30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加乙醇1ml‑2ml使溶解，制成对照药材溶液；(3)槐定碱对照品溶液的制备：取槐定碱对照品，加乙醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；(4)吸取上述三种溶液各5μ1，分别点于同一含2％氢氧化钠的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯‑乙酸乙酯‑甲醇‑水，体积比2∶4∶2∶1，10℃以下放置的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以改良碘化铋钾试液，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点是苦参；在与对照品色谱相应的位置上，显一个相同的棕色斑点为槐定碱；(五)麦冬的鉴别：(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物4‑8g，研细，加水20‑40ml，加热至沸使溶解，放冷，滤过，滤液加盐酸0.5ml，加热煮沸，放冷，用三氯甲烷20‑40ml振摇提取，分取三氯甲烷层，浓缩至约1‑2ml，作为供试品溶液；(2)麦冬对照药材溶液制备：取麦冬对照药材1g，加水20‑40ml，煎煮10‑20分钟，滤过，滤液加盐酸0.5ml，加热煮沸，放冷，用三氯甲烷20ml振摇提取，分取三氯甲烷层，浓缩至约1‑2ml，作为对照药材溶液；(3)吸取上述两种溶液5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷‑丙酮，体积比4∶1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加热至斑点显色清晰，在日光下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；(六)甘草的鉴别：(1)供试品溶液制备：取中药制剂心速宁胶囊的内容物2‑4g，研细，加盐酸1‑2ml和乙醚15‑30ml，加热回流提取1‑2小时，放冷，滤过，滤液用水洗涤3次，每次5‑10ml，弃去水液，挥干乙醚溶液，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；(2)甘草次酸对照品溶液制备：取甘草次酸对照品，加无水乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；(3)吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)‑甲苯‑乙酸乙酯‑冰醋酸(10∶20∶7∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10﹪磷钼酸乙醇溶液，于105℃加热约5分钟，在日光下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点为甘草次酸；Ⅱ、中药有效成分黄连含量的测定：(1)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙睛‑水，体积比48∶52，1000ml中含KH2PO43.4g，十二烷基磺酸钠1.2g为流动相；检测波长为270nm；理论板数按盐酸小檗碱峰计算，应不低于3500；(2)对照品溶液的制备：精密称取盐酸小檗碱对照品适量，加甲醇制成每1ml含25μg的溶液，即得；(3)供试品溶液的制备取中药制剂心速宁胶囊1粒的内容物，研细，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇‑盐酸，体积比100∶1的混合溶液25‑40ml，密塞，称定重量，超声处理功率250W，频率40kHz，30‑50分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取2ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(4)测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得每粒中药制剂心速宁胶囊的内容物含黄连以盐酸小檗碱C₂₀H₁₇NO₄·HCl计，不得少于8.0mg。