[发明专利]粉大蕉枯萎病菌的二重PCR分子快速检测方法有效
申请号: | 201410828054.7 | 申请日: | 2014-12-25 |
公开(公告)号: | CN104450939A | 公开(公告)日: | 2015-03-25 |
发明(设计)人: | 吕顺;曾莉莎;周建坤;王芳;夏玲;杜彩娴 | 申请(专利权)人: | 东莞市香蕉蔬菜研究所 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/645 |
代理公司: | 广州三环专利代理有限公司 44202 | 代理人: | 张艳美;曾毓芳 |
地址: | 523061 广*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | 本发明公开了一种粉大蕉(粉蕉及大蕉)枯萎病菌的二重PCR分子快速检测方法。本发明从粉大蕉枯萎病菌特有的基因序列入手,设计了两对针对粉大蕉枯萎病菌的分子特异引物,从而建立一种快速可靠的分子检测技术。该方法利用两对特异引物同时对样本中含的DNA进行PCR反应,当产物呈现755bp的扩增条带时,即表明样本中含有大蕉枯萎病病原菌;当产物呈现590bp的扩增条带时,即表明样本中含有粉蕉或大蕉枯萎病病原菌。该方法操作简单、耗时少,灵敏度高,检测粉大蕉枯萎病菌菌丝的灵敏度可达0.4μg。该方法同时可应用于直接分离的病原菌、香蕉患病组织、种苗、或土壤和灌溉水的检测,防止大蕉枯萎病的扩散与蔓延,确保香蕉安全生产。 | ||
搜索关键词: | 大蕉 枯萎 病菌 二重 pcr 分子 快速 检测 方法 | ||
【主权项】:
一种粉大蕉枯萎病菌的二重PCR分子快速检测方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)设计粉大蕉枯萎病菌类群1和类群2特异引物,引物序列如下:(2)对样本进行处理,抽提样本DNA;(3)以样本DNA为模板,使用粉大蕉枯萎病菌类群1和类群2特异引物进行二重PCR扩增反应;(4)用1.2%‑1.5%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物,当PCR产物呈现755bp的扩增条带时,即表明样本中含有大蕉枯萎病菌,当PCR产物呈现590bp的扩增条带时,表明样本中含有粉蕉或大蕉枯萎病菌。
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