[发明专利]一种胎盘干细胞库的构建方法及胎盘组织复苏方法

摘要

一种胎盘干细胞库的构建方法及胎盘组织复苏方法，它涉及一种胎盘干细胞库建立方法。本发明的干细胞库构建方法为：将至少3个部位的胎盘组织经过无菌清洗处理后，组织剥离、进一步消毒、剪细、冷冻剂保护，程序化冷冻、深低温暂存、液氮罐长期保存等步骤，长期保存了具有生物学活性的胎盘组织。此方法保存的胎盘组织可应用于胎盘干细胞库的建立，根据所需要细胞种类进行选择组织部位复苏后复苏、酶消化、培养、扩增、质量检验等，以便获得胎盘羊膜上皮细胞、胎盘羊膜间充质、胎盘绒毛膜间充质干细胞、胎盘底蜕膜间充质干细胞等。本发明的方法简化操作步骤，减少人工干预错误，提高效率、保存了多种干细胞资源、为未来个性化干细胞定制提供基础。

主权项

一种胎盘干细胞库构建方法，其特征在于它是按照以下步骤进行：一、胎盘采集：采集留有3～5cm脐带的完整胎盘，备用；二、胎盘组织预处理：取步骤一至少3个部位的胎盘组织分别采用组织剪、钳进行仔细剥离、收集，收集后的组织分别用生理盐水洗净血液、剪小至0.5～1mm³大小，分别用生理盐水清洗2～3遍，其中，每次清洗后在1300rpm转速下离心6min，收集沉淀，继续下一次清洗；清洗结束后，收集沉淀备用；三、组织块冻存液配制：所述冻存液每1mL是由0.68～0.72mL DMEM、0.07～0.12mL胎牛血清、0.01～0.02mL L‑谷氨酰胺和0.2mL二甲基亚砜组成，配制好后于4℃预冷保存；或者组织块冻存液采用无血清培养基进行配制；四、组织程序化冻存：将步骤二预冷保存的组织块用0.5倍组织块体积的培养基重悬配成组织悬液，再加入0.5～1.5倍组织悬液体积的步骤三配制的冻存液，然后分装至冻存管内，首先在程控降温盒中4℃平衡30min，然后转入‑80℃过夜暂存；五、对每一个冻存管设低温防冻条码，进行管理；六、对步骤二的预处理后的胎盘组织样本和步骤五复苏的胎盘组织进行厌氧菌、需氧菌、霉菌、乙肝病毒、丙肝病毒、艾滋病毒和梅毒检测；将检测结果全部为阴性的胎盘组织转入‑150℃～‑180℃液氮罐气相中长期保存，即构建出胎盘干细胞库。