[发明专利]一种在毕赤酵母和汉逊酵母中进行异源蛋白表达的通用载体的构建与应用在审
| 申请号： | 201410855978.6 | 申请日： | 2014-12-31 |
| 公开（公告）号： | CN104480131A | 公开（公告）日： | 2015-04-01 |
| 发明（设计）人： | 马雁冰;金晓媚;刘存宝;姚宇峰;杨旭;黄惟巍;孙文佳;龙琼;李杨;褚晓杰 | 申请（专利权）人： | 中国医学科学院医学生物学研究所 |
| 主分类号： | C12N15/66 | 分类号： | C12N15/66;C12N15/81;C07K14/025 |
| 代理公司： | 昆明正原专利商标代理有限公司 53100 | 代理人： | 徐玲菊 |
| 地址： | 650118 *** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | 本发明涉及构建基于甲醇营养型汉逊酵母和毕赤酵母的通用载体，其构建方法包括如下步骤：步骤（1），用限制性内切酶BglⅡ和BamHⅠ双酶切质粒pHanMOX-GFP，得到pHan载体；步骤（2），用限制性内切酶BglⅡ和BamHⅠ双酶切消化载体质粒pPinkAOX1-HPV16L1，回收片段PAOX1-HPV16L1-CYC1TT后与步骤（1）所得pHan载体以T4连接酶16℃连接过夜，转化并涂布含0.1mg/mL卡那霉素的LB平板，提取质粒酶切鉴定，得到重组汉逊酵母质粒pHanAOX1-HPV16L1。本发明使用上述通用载体指导了人乳头瘤病毒16型主要衣壳蛋白L1在毕赤酵母和汉逊酵母中的表达。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 酵母 进行 蛋白 表达 通用 载体 构建 应用 | ||
【主权项】：
一种在毕赤酵母和汉逊酵母中进行异源蛋白表达的通用载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤（1），用限制性内切酶BglⅡ和BamHⅠ双酶切质粒pHanMOX‑GFP，得到pHan载体；步骤（2），用限制性内切酶BglⅡ和BamHⅠ双酶切消化载体质粒pPinkAOX1‑HPV16L1，回收片段PAOX1‑HPV16L1‑CYC1TT后与步骤（1）所得pHan载体以T4连接酶16℃连接过夜，转化并涂布含0.1mg/mL卡那霉素的LB平板，提取质粒酶切鉴定，得到重组汉逊酵母质粒pHanAOX1‑HPV16L1，该质粒即为通用载体。
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