[发明专利]抗体的原位亲和力成熟作用

摘要

本发明关于一种模拟生发中心反应而直接在融合瘤中生成具有不同结合性质或较高亲和力的抗体的方法。为方便而快速地进行抗体的亲和力成熟作用，开发了一种可控制型活化诱导胞苷去胺酶(AID)表达系统，其可在融合瘤中诱导体细胞高频突变。通过荧光活化细胞分选技术，可从会优先与经荧光标记的抗原结合的融合瘤中选出高亲和力抗体。本发明亦关于一种具有可调式抗体亲和力的融合瘤的新生成方法，其是通过生成具有可控制型AID表达的骨髓瘤融合伴侣而达成。

主权项

一种在可生产单克隆抗体的既有融合瘤细胞中使亲和力成熟及抗体类别转换重组的方法，该方法包含下列步骤：(a)使用可控制型活化诱导胞苷去胺酶表达系统，在所述既有融合瘤细胞中表达活化诱导胞苷去胺酶但不表达选殖抗体基因；(b)测定自然出现在所述既有融合瘤细胞表面上的抗体的表达量及抗原结合能力；(c)通过所述自然出现在所述既有融合瘤细胞表面上的抗体，通过荧光活化细胞分选的方式，从会优先与经荧光标记的抗原结合的融合瘤细胞中选出会分泌高亲和力抗体的融合瘤细胞；以及(d)重复进行所述方法，直到所分离出的融合瘤会分泌亲和力够高的抗体后，通过对所述细胞转染CRE重组酶或通过移除脱氧羟四环素来终止所述步骤(a)。