[发明专利]聚合酶链式反应检测系统

摘要

本发明涉及用于测定系统中的核酸检测的方法和试剂盒。

主权项

一种用于检测引物延伸产物的方法，所述方法包括以下步骤：a)提供一个或多个寡核苷酸引物组，每组包含一个或多个寡核苷酸引物集，每个引物集的特征在于i)第一寡核苷酸引物(正向引物)，其具有靶特异性部分和5'上游荧光盒特异性部分，以及ii)第二寡核苷酸引物(反向引物)，其具有靶特异性部分，其中特定引物集中的寡核苷酸引物分别适用于在相应靶核苷酸序列的互补链上的杂交以允许形成引物延伸产物，例如PCR产物，并且其中同一组中的每个引物集的第一寡核苷酸引物含有荧光盒特异性部分，所述荧光盒特异性部分能够与同一组中任一引物集的第一寡核苷酸引物的荧光盒特异性部分的互补物进行杂交；b)提供一个或多个盒寡核苷酸集，每集的特征在于i)第一盒寡核苷酸，其用荧光部分(供体部分)标记，并且具有能够与给定寡核苷酸引物组中任一引物集的第一寡核苷酸引物的荧光盒特异性部分的互补物进行杂交的序列，以及ii)第二盒寡核苷酸，其用受体部分(例如淬灭剂部分)标记，其中每个盒寡核苷酸集互相杂交以形成荧光淬灭对，其中所述荧光淬灭对具有Tm A；c)起始引物延伸反应，从而产生与相关的第一寡核苷酸引物互补的序列(如果存在相关的靶多核苷酸)，这样，相关的第二(受体，例如淬灭剂，被标记)盒寡核苷酸与相关的第一(荧光标记)盒寡核苷酸杂交的能力降低，藉以产生信号；以及d)检测所产生的信号，其中所述引物延伸反应至少部分在小于一个或多个荧光淬灭对的Tm A的Ta进行。